[发明专利]一种从组分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法

摘要

本发明采用溶解组分IV‑2沉淀、分离组分IV‑1沉淀、分离组分IV‑2沉淀、分离组分V沉淀、组分V沉淀溶解、过滤、超滤透析、浓缩、加温纯化、过滤、超滤透析、浓缩和配制的步骤用来制备人血白蛋白，各步骤前后紧密相连、层层相扣，所生产得到的人血白蛋白半成品，蛋白质含量在20.1％以上，纯度不低于蛋白质总量的98.0％，pH值为6.5～7.3，残余乙醇含量不高于0.025g/100ml。

主权项

一种从组分IV‑2沉淀中提取人血白蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：溶解组分IV‑2沉淀将组分IV‑2沉淀用含氯化钠和枸橼酸钠的水溶液完全溶解；步骤二：分离组分IV‑1沉淀用醋酸‑醋酸钠缓冲液调节步骤一的组分IV‑2沉淀的溶解液pH值至6.00～6.30，将温度降至‑1.0～0.0℃，用乙醇调节乙醇终浓度至39～41％，用醋酸‑醋酸钠缓冲液或氢氧化钠溶液调整pH值至6.00～6.30，调节悬液温度至‑6.0℃～‑4.0℃，搅拌均匀，开始悬液压滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为20～90kg/min，滤出液温度为‑5.5～‑3.5℃，悬液压完后清洗回收，回收液并入上清液罐，收集组分IV‑1上清液，组分IV‑1沉淀高压灭菌后废弃；步骤三：分离沉淀用醋酸‑醋酸钠缓冲液调节组分IV‑1上清液pH值至5.70～5.90，用乙醇调节乙醇终浓度至41.5～42.5％，再用醋酸‑醋酸钠缓冲液或氢氧化钠溶液调整pH值至5.70～5.90，调节反应温度至‑7.0℃～‑5.0℃，搅拌反应完全后按每1000kg制品加入硅藻土2.0～3.0kg和珍珠岩2.0～3.0kg，搅拌反应，开始悬液压滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为20～90kg/min，滤出液温度为‑6.0～‑4.0℃，悬液压完后进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，收集组分IV‑2上清液，沉淀高压灭菌废弃；步骤四：分离组分V沉淀用醋酸和乙醇混合液调节组分IV‑2上清液的pH值至4.70～4.90，调节温度至‑9.0～‑8.0℃，搅拌使其反应，开始悬液压滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为20～90kg/min，滤出液温度为‑8.5～‑6.5℃，待悬液全部压滤完后，收集组分V沉淀；步骤五：组分V沉淀溶解、过滤将收集的组分V沉淀用沉淀重量5～7倍的0.0～4.0℃的注射用水溶解，搅拌至沉淀完全溶解，用醋酸‑醋酸钠缓冲液调整pH值至4.50～4.70；调节温度至0.0～4.0℃；继续搅拌使其反应得到溶解液，按每1000kg溶解液加入硅藻土1.0～2.0kg和珍珠岩1.0～2.0kg，搅拌，开始过滤，控制过滤压力为0～0.3MPa，过滤速度为10～60kg/min，滤出液温度为0.0～5.0℃，溶解液压完后进行清洗回收，滤液用氢氧化钠溶液调节pH值至6.50～7.30，过滤沉淀高压灭菌废弃，得到过滤液；步骤六：超滤透析、浓缩用膜规格为10kD超滤器将步骤五得到的过滤液浓缩至蛋白质含量为8～12％，用4～6倍体积的2～8℃注射用水连续等体积透析，再用氢氧化钠溶液或醋酸‑醋酸钠缓冲液调整制品pH值至6.60～6.90，用注射用水稀释控制最终蛋白质含量为20.0～50.0g/L；步骤七：加温纯化、过滤将超滤后浓度为20.0～50.0g/L的蛋白溶液加温至50.0～55.0℃，恒温1～3小时，恒温结束降温至18～26℃，转移至白蛋白精制罐，用醋酸‑醋酸钠缓冲液调节制品pH值至4.50～4.70，继续降温至0.0～0.5℃，用乙醇调节乙醇终浓度至11～13％，调节最终温度至‑3.5～‑2.5℃，继续搅拌反应，反应完全后按每1000kg悬液加入珍珠岩1.0～2.0kg，搅拌，开始过滤，控制过滤压力为0～0.2MPa，过滤速度为10～60kg/min，滤出液温度为‑3.4～‑2.0℃，悬液压滤完进行清洗回收，用氢氧化钠溶液调节过滤上清液pH值至6.60～6.90，调节最终温度至‑3.0～‑2.0℃；步骤八：超滤透析、浓缩、配制将步骤七得到的pH调节后的蛋白液经超滤浓缩至蛋白质含量为10～14％，然后依次进行连续等量透析，浓缩蛋白浓度至20.0～21.0％，按每克蛋白质加入0.15～0.18mmol辛酸钠的比例加入辛酸钠，用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调整最终pH值至6.50～7.30，再进行59.5～60.5℃恒温8～12小时巴氏病毒灭活和除菌分装，即可得到人血白蛋白半成品；所述组分IV‑2沉淀是采用以下方式获得：用乙醇将血浆分离成组分I+II+III沉淀和组分I+II+III上清液；然后用乙醇将组分I+II+III上清液分离成组分IV‑1沉淀和组分IV‑1上清液；然后用乙醇将组分IV‑1上清液分离成组分IV‑2上清液和组分IV‑2沉淀；或者用乙醇将血浆分离成组分FI沉淀和组分FI上清液；然后用乙醇将组分FI上清液分离成组分II+III沉淀和组分II+III上清液；然后用乙醇将组分II+III上清液分离成组分IV‑1沉淀和组分IV‑1上清液；然后用乙醇将组分IV‑1上清液分离成组分IV‑2上清液和组分IV‑2沉淀。