[发明专利]一株能够利用木糖的酵母Candida amazonensis的表达系统

摘要

本发明涉及一株能够利用木糖的酵母Candida amazonensis的表达系统，包括一种新型表达载体，其为环状，从5’‑3’依次可操作性地连接有以下元件：pMD19‑Tsimple质粒骨架、rDNA同源重组序列、外源基因表达盒和筛选标记基因表达盒；所述外源基因表达盒自上游至下游依次包括启动子、外源基因插入酶切位点以及转录终止子；所述筛选标记基因表达盒包括启动子、抗生素抗性基因、转录终止子。所述能够利用木糖的酵母为Candida amazonensis。本发明的表达载体可实现在Candida amazonensis中的整合型稳定表达，对木糖利用酵母Candida amazonensis的基础理论研究及产品开发具有重要的意义。

主权项

1.一种能够利用木糖的酵母Candida amazonensis的表达系统，其特征在于包括能够利用木糖的酵母Candida amazonensis以及一种表达载体，所述酵母Candida amazonensis保藏于荷兰真菌菌种保藏中心，保藏编号为CBS 12363；所述表达载体从5’‑3’依次包括以下可操作性元件：pMD19‑Tsimple质粒骨架、rDNA同源重组序列、外源基因表达盒和筛选标记基因表达盒；所述外源基因表达盒自上游至下游依次包括启动子、外源基因插入酶切位点以及转录终止子；所述筛选标记基因表达盒包括启动子、抗生素抗性基因、转录终止子；所述rDNA同源重组序列为18s rDNA序列；设计两条引物截取Spathaspora passalidarum 18s rDNA部分序列作为同源重组位点；引物序列为：P1：5’GCCGGAATTCTGCCAGTAGTCATATGCTTGTCTC3’；P2：5’ATATTAGGGGTACCCGGGATCCGAAGATCTGTTGAAGAGCAATAAT3’；所述外源基因表达盒中的启动子为SpADHP、SpXYLP；转录终止子为SpCYC1T、SpXYLT；所述筛选标记基因表达盒中的启动子为SpTEF1P；抗生素抗性基因为潮霉素抗性基因、博来霉素抗性基因或G418；转录终止子为SpCYC1T、ScCYC1T；所述的18s rDNA序列如SEQ ID NO:1所示；所述的SpADHP启动子为Spathaspora passalidarum来源的乙醇脱氢酶基因ADH1启动子，该启动子的DNA序列如SEQ ID NO:2所示；所述的SpXYLP启动子为Spathaspora passalidarum来源的木糖还原酶基因XYL启动子，该启动子的DNA序列如SEQ ID NO:3所示；所述的SpTEF1P启动子为Spathaspora passalidarum来源的转录起始因子基因TEF1启动子，该启动子的DNA序列如SEQ ID NO:4所示；所述的SpCYC1T终止子为Spathaspora passalidarum来源的细胞色素C基因CYC1终止子，该终止子的DNA序列如SEQ ID NO:5所示；所述的SpXYLT终止子为Spathaspora passalidarum来源的木糖还原酶基因XYL终止子，该终止子的DNA序列如SEQ ID NO:6所示；所述的ScCYC1T终止子为Saccharomyces cerevisiae来源的细胞色素C基因CYC1终止子，该终止子的DNA序列如SEQ ID NO:7所示；所述的潮霉素抗性基因的DNA序列如SEQ ID NO:8所示；所述潮霉素抗性基因以pRS303H质粒DNA为模板；所述的博来霉素抗性基因的DNA序列如SEQ ID NO:9所示；所述的G418的DNA序列如SEQ ID NO:10所示。