[发明专利]干海参线粒体的提取与纯化技术

摘要

一种干海参线粒体的提取与纯化技术，其制备方法是：以干海参为原料，采用优化后的溴化十六烷基三甲基铵法提取其线粒体，通过A260/A280值、琼脂糖凝胶电泳和PCR检测，对所得线粒溶液进行定量，定性分析和综合比较，为干海参的分子生物学研究提供了一套迅速、经济和可靠的技术方案。

主权项

一种干海参线粒体的提取与纯化技术，其制备方法如下：取实验材料为仿刺参和大西洋海参的干参制品，以少煮多泡的原则浸发开，立即使用或置于‑80℃超低温冰箱保存备用；线粒体提取纯化方法：（1）称取0.3g海参体壁，冲洗干净，用无菌纸吸干，切碎或置液氮研碎；（2）将样品放于600µlr 的蛋白酶水解液中；（3）样品迅速置于65℃水溶2h以上，若溶解不完全，则可过夜处理，直至样品完全溶解；（4）冷却至室温后，加入等体积的氯仿一异戊醇轻柔颠倒；（5）室温10000r/min，离心10min,收集上清液；（6）重复以上两个步骤几次，至有机相和水相之间无变性蛋白质；（7）取上清液加入等体积的沉淀缓冲液，保温于65℃，30min；（8）以氯仿一异戊醇抽提几次，至有机相和水相之间无杂质；（9）收集上清液，加等体积的异丙醇轻柔颠倒，13000r/min；可得到白色沉淀；（10）沉淀用70%的乙醇清洗两次，空气干燥后，用100µlTE缓冲液溶解，4℃保存备用。