[发明专利]磁性交联酶聚集体催化合成苯丙烯基β-D-葡萄糖苷的方法

摘要

本发明提供磁性交联酶聚集体催化合成苯丙烯基β‑D‑葡萄糖苷的方法，属于生物催化领域，利用底物苯丙烯醇与D‑葡萄糖在酶的作用下糖基化合成苯丙烯基β‑D‑葡萄糖苷，反应体系为非水相体系。利用磁性交联β‑葡萄糖苷酶聚集体催化糖基化合成苯丙烯基β‑D‑葡萄糖苷的报道还未有所见，本发明具有独特新颖的自主创新性，在非水相体系中，能保证酶的活力与稳定性，以及使热力学平衡朝逆水解反应方向进行。该体系简单，可一步直接合成苯丙烯基β‑D‑葡萄糖苷，产物易分离纯化，纯度高。本反应所选用的底物均为廉价的化工原料，与从红景天属植物中提取苯丙烯基β‑D‑葡萄糖苷的传统方法比，大大节约了成本，适用于工业化生产。

主权项

1.磁性交联酶聚集体催化合成苯丙烯基β‑D‑葡萄糖苷的方法，其特征在于：此方法是利用底物苯丙烯醇与D‑葡萄糖在酶的作用下于非水相体系即有机溶剂‑缓冲溶液体系中合成苯丙烯基β‑D‑葡萄糖苷，反应在特定的条件下进行；所述的有机溶剂采用乙腈、1,4‑二氧六环、丙酮中的任意一种；所述的有机溶剂的体积含量为60~95%；所述缓冲液为0.1 M的柠檬酸‑磷酸氢二钠缓冲溶液，pH范围为4~7；所述反应的苯丙烯醇浓度为20~300g/L，D‑葡萄糖浓度为50~150g/L；所述磁性交联酶聚集体的制备方法为：（1）将1.351 g FeCl3、0.685 g FeSO4•7H2O及25 mL的去离子水室温下混匀，加氨水至沉淀不增加，多次离心后用去离子水洗涤至pH值为7.0，90 ℃烘干2 h得到未硅烷化的磁性铁氧化物颗粒；取上述烘干后未硅烷化的磁性铁氧化物颗粒0.02 g，加入2.5 mL甲醇、100 μL 3‑氨丙基三乙氧基硅烷、25 μL去离子水，混合均匀后超声30 min，再加入1.5 mL甘油，90 ℃下剧烈振荡6 h，将混合液离心处理后经100 ℃烘干即得稳定硅烷化后的磁性铁氧化物粒子；（2）5 mL带塞离心管中加入1 mL以pH 5.0的柠檬酸‑磷酸缓冲溶液配制的2 mg/mL β‑葡萄糖苷酶酶液和一定量的磁性铁氧化物颗粒，以有机溶剂作沉降剂，混匀后于6 ℃、200 r/min下振荡10 min；后加入交联剂戊二醛使其在反应体系中达到不同浓度，于6 ℃、200 r/min继续振荡一定时间后以磁铁吸附固定化酶，弃上清液，固形物用去离子水洗涤数次后得到磁性交联酶聚集体。