[发明专利]一种烟草复合抗性种质的高通量筛选方法

摘要

本发明提供了一种烟草复合抗性种质的高通量筛选方法，遵循高通量、快速、简易的筛选原则，本发明从筛选乙烯不敏感突变体着手，通过仅需要一周时间就可完成的乙烯“三重反应”，对大量材料进行快速、高通量的初步筛选；在此基础上进行耐寒与耐旱的复合种质的筛选。特别是在耐寒性的筛选上，本发明采用普通家用冰箱就可以满足的4℃条件，无需光照培养，经过暗处理培养后，通过观测分析幼苗的下胚轴和根的长度来判断其的耐寒性，区别于一般对实验仪器要求较高的零下低温筛选的方法，开创了新的简易的耐寒种质的筛选方法。烟草复合种质的筛选方法对抗逆育种以及研究乙烯对抗逆的影响提供了简易的基础材料筛选方法。

主权项

一种烟草复合抗性种质的高通量筛选方法，其特征在于它包括以下步骤：（1）烟草乙烯不敏感种质的筛选a、表面消毒：取待筛选的烟草种子与烟草野生型种子用次氯酸钠消毒后用无菌水冲洗；b、低温处理：将已消毒的所述烟草种子点播在1/2 MS+100 μM ACC的培养基上，并将其置于4℃，黑暗培养3 d；c、光照催芽与暗培养：于25℃光照培养10 h；之后将其于25℃下避光暗培养5‑6 d；d、乙烯不敏感种质的鉴别：烟草野生型种子出现“三重反应”的表型：幼苗的主根变短、下胚轴缩短变粗、子叶形成顶钩；“三重反应”呈现不明显表型的为乙烯不敏感种质；（2）乙烯不敏感‑耐寒复合种质的筛选以所述筛选出的乙烯不敏感种质的烟草种子为测试材料，以烟草野生型种子为对照，按以下步骤进行筛选：a、表面消毒：取所述烟草乙烯不敏感种质与野生型种子用次氯酸钠消毒后用无菌水冲洗；b、低温处理：将已消毒的烟草种子点播在1/2 MS的培养基平板上，并将其置于4℃，黑暗培养3 d；c、处理前光照培养：于25℃光照条件下培养3 d至种子萌发；d、低温筛选：选取萌发一致的幼苗转移到1/2 MS的培养基平板上，然后用锡箔纸包起来在4℃低温下暗培养60 d；e、乙烯不敏感‑耐寒种质的鉴别：烟草野生型在低温条件下根长及下胚轴生长受抑制变短，而“乙烯不敏感‑耐寒”抗性种质的根长及下胚轴生长不受抑制或抑制较轻，筛选出乙烯不敏感‑耐寒抗性种质。