[发明专利]杂交瘤细胞BPA‑4C7及其产生的双酚A单克隆抗体

摘要

本发明提供了杂交瘤细胞株 4C7、其分泌产生的抗双酚A单克隆抗体及其应用。该杂交瘤细胞株 4C7可以用于制备高效价双酚A抗体，鼠腹水抗体酶联免疫吸附分析(ELISA) 法测得的效价可达 3.12×106；该抗双酚A单克隆抗体灵敏度高，对双酚A的 50％抑制浓度即 IC50为0.28μg/L，其用于测定双酚A含量，实际应用价值大。

主权项

杂交瘤细胞株BPA‑4C7，其特征在于：已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.10201；其中所述的杂交瘤细胞是通过BPA与BSA形成的人工抗原免疫小鼠后获得的淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合筛选获得，其中所述的人工抗原的制备方法如下：BPA通过活化得到BPA羧酸酯，水解得到BPA羧酸，再在EDC和NHS存在的条件下与载体蛋白发生偶联反应，得到相应的人工抗原；具体为：1)BPA羧酸的合成将1.14g BPA溶于30mL丙酮，加入276mg碳酸钾；将143μL 4‑溴丁酸乙酯溶于1mL丙酮，然后将该溶液滴加到沸腾的BPA溶液中，得到化合物A；将18mg化合物A溶于2mL乙醇，然后将0.5ml的1M氢氧化钠溶液加入其中；反应液在油浴中加热回流1小时；压蒸馏得到产物的钠盐；用2ml水将粗品溶解，用2M盐酸调至pH＝2，然后用2mL乙酸乙酯萃取4次，乙酸乙酯相用无水硫酸钠干燥，吹干得到BPA的羧酸，其为白色晶体12mg；2)人工抗原的合成取12mg干燥的BPAB溶于1.2ml的DMF中配制成10mg/ml溶液备用；将85mg的EDC和27mg的NHS溶于0.6ml的DMF中，取配置好的BPAB溶液滴加到EDC的溶液中，室温震荡24个小时得到活化的BPAB溶液；在3ml的棕色试剂瓶中加入0.282ml的硼酸‑硼砂缓和0.718ml的BSA液， 然后将活化好的0.4mL BPAB溶液滴加到BSA溶液中，室温搅拌20个小时；反应完成后，用2L PBS透析3次，每次一天；最后将透析袋中的液体收集，‑20℃保存；其中所述的硼酸‑硼砂缓冲液浓度为0.2M， pH为7.4，BSA溶液为50mg/mL；3)人工抗原的鉴定通过紫外光谱扫描法及质谱鉴定表明制备得到了双酚A的完全抗原BPA‑BSA。