[发明专利]一种用于鱼腥草分子鉴定的DNA条形码，引物、试剂盒和鉴定方法

摘要

本发明涉及一种用于鱼腥草分子鉴定的DNA条形码，引物、试剂盒和鉴定方法。该方法通过鱼腥草植物及其主要混伪品DNA提取，然后利用DNA条形码引物进行PCR扩增，扩增出的片段按照核苷酸序列特征变异位点进行物种鉴别。该方法可用于鱼腥草和混伪品白苞裸蒴无法从形态上加以识别的种间鉴定，而且本发明操作简单、结果可靠、检测速度快速、不受植株生长发育时期和环境的影响，可大大提高鉴定效率。

主权项

一种用于鱼腥草分子鉴定的方法，其特征在于：该方法用于区分鱼腥草与白苞裸蒴，以正向序列F：GGAAGTAAAAGTAACAAGG，反向序列R：TCCTTCCGCTTATTGATATGC为引物，以待检测样品的基因组DNA为模板，进行PCR扩增，分别扩增出642bp和626bp大小的DNA片段，序列如SEQ NO:1和NO:2；将扩增出来的片段进行测序：鱼腥草在位点4上的碱基为A，位点5上的碱基为T，位点36上的碱基为C，位点41上的碱基为A，位点46‑48上的碱基为TCG，位点56‑57上的碱基都为GG，位点67‑68上的碱基为CC，位点71上的碱基为G，位点76‑78上的碱基为CCA，位点84‑86上的碱基为CCC，位点96‑97上的碱基为GA，位点102‑103上的碱基为CG，位点107‑108上的碱基为GA，位点111上的碱基为C，在位点131上的碱基为G，位点136‑138上的碱基为ATT，位点141‑143上的碱基为CCA，位点155上的碱基为A，位点159上的碱基为C，位点170上的碱基都为C，位点176上的碱基为G，位点185‑186上的碱基为CG，位点208上的碱基为C，位点376‑377上的碱基为GC，位点383‑384上的碱基为GA，位点392‑393上的碱基为CC，位点396‑398上的碱基为GCC，位点405‑407上的碱基为GAG，位点414‑415上的碱基为CT，位点423‑424上的碱基为GG，位点429‑430上的碱基为GT，位点433‑437上的碱基为GACGT，位点443上的碱基为G，位点448上的碱基为A，位点452‑455上的碱基为CCCT，位点462上的碱基为C，位点465‑467上的碱基为CCG，位点474上的碱基为T，位点482上的碱基为A，位点495上的碱基都为C，位点508上的碱基为G，位点515‑516上的碱基为GT，位点523‑524上的碱基为GA，位点530上的碱基为G，位点532上的碱基为A，位点539上的碱基为G，位点554上的碱基为C，位点562‑563上的碱基为AC，位点565‑567上的碱基为AGC，位点572上的碱基为T，在位点576‑578上的碱基为ATA，位点581上的碱基为C，位点592上的碱基为G，位点595上的碱基为C，位点597上的碱基为A，位点600上的碱基都为G；而白苞裸蒴在位点4上的碱基为C，位点5上的碱基为C，位点36上的碱基为G，位点41上的碱基为G，位点46‑48上的碱基为GTC，位点56‑57上的碱基都为AT，位点67‑68上的碱基为GT，位点71上的碱基为T，位点76‑78上的碱基为GTG，位点84‑86上的碱基为ATG，位点96‑97上的碱基为CT，位点102‑103上的碱基为TA，位点107‑108上的碱基为AT，位点111上的碱基为A，在位点131上的碱基为A，位点136‑138上的碱基为CCC，位点141‑143上的碱基为TCC，位点155上的碱基为C，位点159上的碱基为T，位点170上的碱基都为T，位点176上的碱基为C，位点185‑186上的碱基为AC，位点208上的碱基为T，位点376‑377上的碱基为TA，位点383‑384上的碱基为CG，位点392‑393上的碱基为AG，位点396‑398上的碱基为TTG，位点405‑407上的碱基为CCC，位点414‑415上的碱基为GG，位点423‑424上的碱基为TT，位点429‑430上的碱基为CC，位点433‑437上的碱基为ACGTG，位点443上的碱基为T，位点448上的碱基为C，位点452‑455上的碱基为TTGC，位点462上的碱基为T，位点465‑467上的碱基为GTA，位点474上的碱基为C，位点482上的碱基为G，位点495上的碱基都为T，位点508上的碱基为A，位点515‑516上的碱基为AC，位点523‑524上的碱基为CC，位点530上的碱基为A，位点532上的碱基为C，位点539上的碱基为A，位点554上的碱基为G，位点562‑563上的碱基为GA，位点565‑567上的碱基为CCG，位点572上的碱基为G，在位点576‑578上的碱基为GCC，位点581上的碱基为T，位点592上的碱基为T，位点595上的碱基为G，位点597上的碱基为C，位点600上的碱基都为A。