[发明专利]一种海绵动物水溶性肽类的制备方法

摘要

一种海绵动物水溶性肽类的制备方法，涉及一种肽类制备方法。将海绵动物破碎，用提取缓冲液浸泡，超声，离心后获得可溶解蛋白/肽类水溶液，过滤后进行吸附/解吸附，获得脱盐后的肽类第一级粗提物；将肽类第一级粗提物经旋转蒸发浓缩后进行第二级纯化，获得10～30个第二级组分，或再经冷冻干燥以粉末状态避光低温长期保存，第二级纯化的具体方法是采用乙腈‑水梯度反相HPLC方法，获得10～30个第二级组分；将第二级组分中主成分小于95％的二级组分经旋转蒸发浓缩后进行第三级纯化，获得海绵动物水溶性肽类，或再经冷冻干燥以粉末状态避光低温长期保存。可增加肽的种类、提高处理规模和分离效率，以便利海绵活性肽类药物开发。

主权项

一种海绵动物水溶性肽类的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)将海绵动物破碎，用提取缓冲液浸泡，超声，离心后获得可溶解蛋白/肽类水溶液，过滤后进行吸附/解吸附，获得脱盐后的肽类第一级粗提物；所述提取缓冲液的配方为：水，10％乙醇，20mM Tris‑HCl pH7.5，5mM EDTA，0.5％Triton X‑100或NP‑40，临用时加1mMβ‑巯基乙醇、20μM苯硫脲、1mM PMSF和10μg/mL抑肽酶，每隔1h加一次PMSF；所述吸附/解吸附流程采用大孔吸附树脂吸附，将处理好的大孔吸附树脂与切向流滤过液混合，4℃下，通过摇床、磁力搅拌、机械搅拌等方式连续搅拌10～14h，之后用去离子水漂洗大孔吸附树脂至少5次，再将大孔吸附树脂装入层析柱用层析系统在280nm或215nm波长检测肽类洗脱过程，洗脱中逐步提高乙醇浓度到75％，最后用50mM NaOH洗脱，最大量的组分在60％～75％乙醇区间洗脱，收集10％～50乙醇洗脱组分和50mM NaOH洗脱组分；2)将肽类第一级粗提物经旋转蒸发浓缩后进行第二级纯化得10～30个第二级组分，或再经冷冻干燥以粉末状态避光低温长期保存；3)将第二级组分中主成分小于95％的二级组分经旋转蒸发浓缩后进行第三级纯化得海绵动物水溶性肽类，或再经冷冻干燥以粉末状态避光低温长期保存。