[发明专利]一种法氏囊病毒效价的测定方法

摘要

本发明公开了一种法氏囊病毒效价的测定方法，通过细胞传代、消化后细胞原液细胞计数及细胞原液的最终稀释，铺细胞板并培养、病毒的稀释、细胞板换液并加病毒液培养观察、细胞病变观察及结果判定六个步骤来测定法氏囊病毒效价，本发明将细胞消化后，通过细胞计数板对细胞进行计数，换算出细胞原液密度，然后根据原液的密度将细胞原液稀释，铺板时每板每孔中加稀释后的细胞液100ul，含细胞数为2～3×104个细胞，然后以细胞100%病变作为判定标准，提高了法氏囊病毒效价测定结果的准确性与稳定性。

主权项

一种法氏囊病毒效价的测定方法，其特征在于：其包括以下步骤：1) 细胞传代：将培养48小时的用于铺板的细胞倒去培养液，用磷酸盐缓冲液将细胞洗两遍后，加入胰酶消化液进行消化，然后加入与倒去的培养液等体积的营养液，混合均匀，得到细胞原液；2) 消化后细胞原液细胞计数及细胞原液的最终稀释：将步聚1）的细胞原液取出一部分，稀释后，加入细胞计数板中进行计数，并换算出细胞原液的密度；再根据细胞原液的密度，将细胞原液稀释至细胞密度为2‑3×105个细胞/ml的细胞稀释液，待用；3) 铺细胞板并培养：将上述细胞稀释液加入96孔细胞培养板中，每孔加细胞稀释液100ul，然后将细胞培养板置于37℃二氧化碳培养箱中培养24h，待用；4) 病毒的稀释：取法氏囊病毒液，用不含血清的营养液逐步稀释，得到10‑6，10‑7，10‑8的法氏囊病毒稀释液；5）细胞板换液并加病毒液培养观察：将步骤3）中培养24h的96孔细胞培养板倒去废液，然后将10‑6，10‑7，10‑8的法氏囊病毒稀释液加入96孔细胞培养板中，每个稀释度加6孔，每孔100ul，然后将细胞培养板置于37℃二氧化碳培养箱中培养96 h；6）细胞病变观察及结果判定：上述细胞培养板培养96h后，观察细胞病变，以100%的细胞病变作为判定标准，计算病毒效价TCID50/0.1mL。