[发明专利]一种双特异性抗体EGFR×CD3的构建及应用

摘要

本发明提供了一种双特异性抗体，本申请的双特异性抗体由单链单元和单价单元组成，其中该单链单元针对免疫细胞的表面抗原CD3具有特异性结合能力，该单价单元针对肿瘤细胞表面抗原EGFR具有特异性结合能力；该单链单元包含与Fc片段融合的单链可变片段(ScFv)，该单价单元包含轻链和重链对。本申请还提供双特异性抗体的制备方法以及这些抗体的药学用途。

主权项

1.双特异性抗体，其特征在于，所述该抗体包含：(a)单价单元，为轻链‑重链对，该轻链‑重链对针对肿瘤细胞表面抗原具有特异性结合能力，该肿瘤细胞表面抗原是EGFR；和(b)单链单元，为融合肽，该融合肽包含单链可变片段ScFv和具有铰链区、CH2结构域和CH3结构域的Fc片段，其中该融合肽针对免疫细胞表面抗原CD3具有特异性结合能力；其中，单 链单元包括针对人源CD3的抗体抗‑CD3，单价单元包括针对EGFR的抗体抗‑EGFR；并且所述抗‑EGFR重链的氨基酸序列为序列号1所示的氨基酸序列，抗‑EGFR的轻链的氨基酸序列为序列号3所示的氨基酸序列，以及所述抗‑CD3ScFv‑Fc的氨基酸序列为序列号9所示的氨基酸序列；并且抗‑EGFR重链在222位点上的半胱氨酸与抗‑EGFR的轻链215位点上的半胱氨酸以二硫键的形式连接，所述的抗‑EGFR重链在228和231位点上的半胱氨酸与抗‑CD3ScFv‑Fc的255和258位点上的半胱氨酸分别以二硫键的形式连接，所述的抗‑EGFR重链在394和411位点上与抗‑CD3ScFv‑Fc的428和397位点上形成盐桥连接，所述的抗‑EGFR重链在368位点上与抗‑CD3ScFv‑Fc的436位点上形成隆突‑入‑穴连接；或所述抗‑EGFR重链的氨基酸序列为序列号5所示的氨基酸序列，抗‑EGFR的轻链的氨基酸序列为序列号7所示的氨基酸序列，以及所述抗‑CD3ScFv‑Fc的氨基酸序列为序列号9所示的氨基酸序列；并且抗‑EGFR重链在222位点上的半胱氨酸与抗‑EGFR的轻链214位点上的半胱氨酸以二硫键的形式连接，所述的抗‑EGFR重链在228和231位点上的半胱氨酸与抗‑CD3ScFv‑Fc的255和258位点上的半胱氨酸分别以二硫键的形式连接，所述的抗‑EGFR重链在394和411位点上与抗‑CD3ScFv‑Fc的428和397位点上形成盐桥连接，所述的抗‑EGFR重链在368位点上与抗‑CD3ScFv‑Fc的436位点上形成隆突‑入‑穴连接。