[发明专利]一种寄生性线虫寄生阶段的体外培养方法

摘要

本发明涉及一种寄生性线虫寄生阶段的体外培养方法，步骤如下：⑴培养基配制；⑵培养：①选择已感染寄生性线虫的螺，处理感染线虫的螺后，将在螺体内寄生的线虫取至固体培养基平板表面上；②用移液器吸取溶液C置于固体培养基平板表面上；③将含有虫体的培养基置于15‑22℃下培养；④每天补充溶液C，保持液面厚度达0.5cm，并每天打开平皿盖，水平摇动培养基，使虫体与氧气充分接触，培养23d后即得寄生性线虫。本发明方法简单、操作方便，分析了寄生性线虫营寄生生活阶段的生理、生化特征，该方法成功地建立了A.cantonensis L3(营寄生生活阶段的感染性3期幼虫体)体外培养技术，首次体外培养营寄生生活阶段寄生性线虫，为寄生性线虫的科学研究提供技术支持。

主权项

一种寄生性线虫寄生阶段的体外培养方法，其特征在于：步骤如下：⑴培养基配制①固体培养基平板的组成成分及配制：琼脂粉2g；1M KH₂PO₄‑K₂HPO₄缓冲液pH＝6.0 2.5ml；1M MgSO₄0.1ml；1M CaCl₂ 0.1ml；将上述培养基成分溶于ddH₂O中，定容至100ml制成溶液A；高压灭菌后，待溶液A冷却至37‑45℃后，向溶液A中加入0.1ml胆固醇乙醇溶液，制成溶液B；其中，所述胆固醇乙醇溶液的配置方法为：胆固醇粉末溶于100％乙醇中，配置成的胆固醇乙醇溶液中胆固醇浓度为5mg/ml；将溶液B混匀后倒板，待凝固后制成固体培养基平板；②液体培养基的组成成分及配制：NaCl 0.5g；Na₂HPO₄·H₂O 0.06g；NaHCO₃ 0.4g；葡萄糖 1g；将上述固体成分溶于ddH₂O中，定容至100ml制成溶液C；⑵培养：①选择已感染广州管圆线虫的螺，处理感染线虫的螺后，将在螺体内寄生的线虫的第三期幼虫用铂金丝挑取或是移液器吸取至制备好的固体培养基平板表面上；②用移液器吸取溶液C置于固体培养基平板表面上，使溶液C液面厚度达0.3‑0.6cm，显微镜下观察，虫体能够自由游动；③将含有虫体的培养基置于15‑22℃下培养；④每天补充溶液C，保持液面厚度达0.3‑0.6cm，并每天打开平皿盖，水平摇动培养基，使虫体与氧气充分接触，虫体培养0‑23天，得与在福寿螺体内营寄生生活所处的滞育状态相同的体外饲养后广州管圆线虫L3幼虫。