[发明专利]一种电化学胃癌肿瘤标志物无标记免疫传感器的制备方法

摘要

本发明公开了一种电化学胃癌肿瘤标志物无标记免疫传感器的制备方法，属于新型纳米功能材料和生物传感器领域。本发明首先在二氧化钛纳米颗粒基底上，利用光电化学合成方法，直接在电极上合成了二氧化钛-贵金属复合材料，进而制得了成本低、灵敏度高、特异性好、检测快速、制备简单的检测胃癌肿瘤标志物的电化学无标记免疫传感器。

主权项

一种电化学胃癌肿瘤标志物无标记免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤为：（1）以直径4 mm的玻碳电极为工作电极，在电极表面滴涂5~10 uL 二氧化钛纳米粒子溶胶TiO₂ NPs，室温下晾干后，滴涂5~10 µL的金银纳米棒溶胶Au@Ag NRs，并在室温下晾干；（2）将步骤（1）中得到的电极超纯水清洗，室温下晾干成膜，表面滴涂5~10uL 0.01 mol/L 的氯钯酸溶液H₂PdCl₄，立刻使用高压汞灯照射30~90秒，制得TiO₂ NPs负载的金银钯合金纳米棒材料Au@Ag‑Pd NDRs修饰的工作电极，室温下晾干；（3）将步骤（2）中得到的电极用超纯水清洗，室温下晾干后，表面滴涂5~10 uL硫堇溶液TH，室温下晾干；（4）将步骤（3）中得到的电极用超纯水清洗，表面滴涂5~10 uL壳聚糖溶液CHS，室温下晾干；（5）将步骤（4）中得到的电极用超纯水清洗后，将电极浸入到EDC/NHS溶液中，1小时后取出；（5）在电极表面滴涂5~10 µL 10 µg/mL的胃癌肿瘤标志物抗体溶液，4 ℃ 冰箱中保存晾干；（6）将步骤（5）中得到的电极用超纯水清洗，继续在电极表面滴涂5~10µL 100 µg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液，4 ℃ 冰箱中保存晾干，超纯水清洗，4 ℃ 冰箱中晾干成膜，制得电化学胃癌肿瘤标志物无标记免疫传感器；所述的TiO₂ NPs为1mg/mL 的二氧化钛纳米粒子水溶液；所述的Au@Ag NRs为金@银核壳纳米棒与壳聚糖复合材料的水溶液，所述金@银核壳纳米棒是以棒状金纳米粒子为核、以银纳米粒子为壳层的核壳结构的棒状纳米粒子，所述棒状纳米粒子的长度为20~50nm；所述的H₂PdCl₄为pH值为1~2的氯钯酸水溶液；所述的Au@Ag‑Pd NDRs 为金银钯合金纳米棒，所述的金银钯合金纳米棒为金@银钯核壳枝晶状的纳米棒，所述金@银钯核壳枝晶状的纳米棒是以棒状金纳米粒子为核、以枝晶状银钯合金纳米粒子为壳层的核壳结构的纳米粒子，所述纳米棒的长度为20~50nm；所述TH为硫堇的水溶液，所述水溶液中硫堇的浓度为5mmol/L；所述CHS为将壳聚糖纯品加入到体积分数为1% 的醋酸中制备而成的壳聚糖水溶液；所述的EDC/NHS为1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N‑羟基丁二酰亚胺NHS的混合溶液，所述混合溶液中EDC的浓度为0.01mol/L，NHS的浓度为0.002mol/L。