[发明专利]一种基于多重PCR快速筛选产龙胆苦苷重组酵母的方法有效
| 申请号： | 201510036407.4 | 申请日： | 2015-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN104593507A | 公开（公告）日： | 2015-05-06 |
| 发明（设计）人： | 钱卫东;周颖欣;王婷;毛培宏 | 申请（专利权）人： | 陕西科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 徐文权 |
| 地址： | 710021 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明提供一种基于多重PCR快速筛选产龙胆苦苷重组酵母的方法：提取候选菌株基因组DNA，进行多重PCR扩增，根据电泳结果从候选菌株中筛选得到含有MECT、MECPS以及GGPPS基因的片段的重组酵母菌株；重组酵母菌株于YPD液体培养基中进行发酵培养，通过对发酵液进行HPLC分析筛选得到产龙胆苦苷重组酵母菌株。本发明以龙胆苦苷生物合成代谢途径关键酶基因作为分子标记，基于多重PCR扩增筛选产龙胆苦苷重组酵母菌株，极大地简化了产龙胆苦苷酵母菌株的筛选过程，方法简单、快速、高效、低廉，是一种具有广泛运用前景的高通量筛选方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 多重 pcr 快速 筛选 龙胆 重组 酵母 方法 | ||
【主权项】：
一种基于多重PCR快速筛选产龙胆苦苷重组酵母的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)重组菌株初筛：将经过低能离子注入介导秦艽总基因组DNA转化处理后的出发酵母菌株接种至YPD固体培养基上进行培养得到转化子，提取转化子基因组DNA，以转化子基因组DNA为模板进行多重PCR扩增，并对扩增产物进行核酸电泳分析，根据电泳分析结果从转化子中筛选得到同时含有MECT基因片段、MECPS基因片段以及GGPPS基因片段的重组酵母菌株；2)重组菌株复筛：将步骤1)筛选得到的重组酵母菌株于YPD液体培养基中进行发酵培养，通过对发酵培养所得发酵液进行HPLC分析筛选得到产龙胆苦苷重组酵母菌株。
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