[发明专利]快速检测柑橘全爪螨拟除虫菊酯抗性的分子标记方法

摘要

本发明一种快速检测柑橘全爪螨拟除虫菊酯抗性的分子标记方法，包括如下步骤1)制备PCR扩增模板以单头柑橘全爪螨为样品；2)进行巢式PCR扩增第一轮PCR以步骤1制备的样品作为扩增模板，使用引物A、B进行PCR扩增；第二轮PCR以第一轮PCR产物作为扩增模板，使用引物C、D进行PCR扩增；3)酶切取第二轮PCR产物用BclI酶进行酶切反应；4)电泳将步骤3中酶切后的反应液用1.5％的琼脂糖凝胶进行电泳，观察307bp和281bp处是否有条带。本发明方法避免了DNA提取这一步骤，直接利用巢式PCR和酶切的方法快速检测单头柑橘全爪螨F1538I突变。

主权项

一种快速检测柑橘全爪螨拟除虫菊酯抗性的分子标记方法，其特征在于：包括如下步骤：1)制备PCR扩增模板：以单头柑橘全爪螨为样品，分别将每个样品放入PCR管中，加入3μL?ddH2O后研磨螨虫体，将研磨好的样品作为第一轮PCR扩增的模板；2)进行巢式PCR扩增：第一轮PCR：以3μL步骤1制备的样品作为扩增模板，使用引物A、B进行PCR扩增；第二轮PCR：以第一轮PCR产物作为扩增模板，使用引物C、D进行PCR扩增；所述引物A、B、C、D的序列如下：A:TATTATGGACCATGCGATTGA；B:CAAAGACGTTCCAAGGTTCTC；C:GTATTTTTTATCATTTTCGGCTCATTG；D:CCTGGTAGTGGTCAAGGGACAT；3)酶切：取步骤2中得到的第二轮PCR产物用BclI酶进行酶切反应；4)电泳：将步骤3中酶切后的反应液用1.5％的琼脂糖凝胶进行电泳，观察307bp和281bp处是否有条带：如果只在307bp处有条带，说明该螨在1538位点为纯合子，基因型为TTC；如果在307bp和281bp处均有条带，说明该螨的基因型为杂合子，等位基因分别为TTC和ATC；如果只在281bp处有条带，则说明该螨的基因型为纯合子，基因型为ATC。