[发明专利]一种组织工程人角膜基质的体外构建方法

摘要

本发明涉及一种组织工程人角膜基质的体外构建方法。其特征是用组织工程人角膜基质体外构建专用培养液A将人角膜基质细胞制成细胞悬液，再将该细胞悬液注射入经载体支架专用复水溶液复水后的脱细胞猪角膜基质载体支架中，置入24孔培养板中，加入体外构建专用培养液A进行体外培养，期间更换体外构建专用培养液B继续培养，即得组织工程人角膜基质。本发明生产成本低、耗时少，更好的保持了载体支架结构的完整性，所构建出的组织工程人角膜基质在形态结构和透明度上与正常人角膜基质相似，并具有正常角膜基质的功能，可作为捐献角膜的替代物用于角膜基质异常的修复，因此已可用于批量生产满足对组织工程人角膜基质的高质量需求。

主权项

一种组织工程人角膜基质的体外构建方法，其特征在于首先切取新鲜猪角膜片进行低渗溶胀，在反复冻融破碎细胞后，以DNA‑RNA酶处理去除其中的残留核酸物质，然后浸入含质量体积百分比10%‑20%右旋糖苷溶液和质量体积百分比0.1%‑0.2%核黄素的角膜专用交联剂溶液，先后利用紫外光A照射交联、漂洗、风干和电离辐照灭菌，制备出组织工程角膜载体支架，最后用载体支架复水溶液对上述载体支架复水后，用角膜环钻制成所需大小的圆形载体支架，用体外构建专用培养液A将人角膜基质细胞制成人角膜基质细胞悬液后，再将该细胞悬液注射入经载体支架复水溶液复水后的并用角膜环钻制成所需大小的圆形载体支架中，放置至24孔培养板孔中，又加入体外构建专用培养液A后，置于37℃、5%二氧化碳培养箱中进行体外培养，期间更换体外构建专用培养液B继续培养，即得到组织结构和功能与正常人角膜基质相近的组织工程人角膜基质；上述体外构建专用培养液A的配方是含有15%小牛血清、0.3‰‑0.5‰凝血酸和0.2‰‑0.4‰纤连蛋白的DMEM/F12培养液；上述体外构建专用培养液B的配方是含有15%小牛血清、0.3‰‑0.5‰凝血酸和0.1‰‑0.5‰ ε‑氨己酸的DMEM/F12培养液；上述载体支架复水溶液的配方是含有1%妥布霉素的DMEM/F12培养液。