[发明专利]一种稳定沉默FGFR4基因表达的肝癌细胞株的制备方法

摘要

本发明公开一种沉默FGFR4基因表达稳定肝癌细胞株的构建方法。构建方法：一，针对人FGFR4基因序列，设计合成3对最佳miRNA的oligo靶序列，分别退火的的产物与干扰载体pcDNATM6.2‑GW/EmGFP进行连接反应，转化大肠杆菌，挑选阳性克隆，测序验证。二，将质粒转染到FGFR4高表达细胞，通过实时荧光定量PCR和Western blot检测各组FGFR4在mRNA和蛋白水平的表达情况，筛选出对肝癌细胞株FGFR4基因沉默效果最明显的miRNA靶点。转染后可作为一种稳定沉默FGFR4基因的肝癌细胞株，用于进一步研究FGFR4在肝癌发生发展中的基因功能。

主权项

一种稳定沉默FGFR4基因表达的肝癌细胞株，其特征在于，构建方法分为以下两部分：1)FGFR4‑miRNA的表达载体构建和鉴定；2)沉默效果最佳的miRNA质粒表达载体的筛选。将沉默效果最佳的miRNA质粒转染到FGFR4高表达肝癌细胞即建立沉默FGFR4基因表达稳定肝癌细胞株。