[发明专利]一种检测三价砷的化学发光传感器及其制备方法

摘要

本发明公开了一种检测三价砷的化学发光器，利用了砷与核酸适配体的特异性识别特征，采用滚环放大原理制备而成，同时本发明公开了其制备方法，本发明制备的化学发光器检测速度快、检测限低、特异性高，且操作简单，快速、灵敏、便于现场检测。

主权项

一种检测三价砷的化学传感器，其特征在于，由以下制备方法制备而成：1） 适配体与三价砷的特异性结合：（1）将10μL,浓度为10μM三价砷的适配体Aptamer和10μL,浓度为10μM的 Probe1 加入灭菌的离心管1中，振荡30s；将混匀的混合液放入95℃的水浴锅中保持10min，后放置于37℃的恒温箱中孵育1h；（2）取三价砷溶液加入到已制备好上述杂交溶液中，振荡30s，然混匀，放入37℃的恒温箱中孵育90min；2）合成环状探针：（1）取45μL灭菌水，6μLT4DNA连接酶buffer，3μL，10μM的挂锁探针和6μL，10μM连接探针于灭菌的离心管2中，振荡30s；（2）将离心管2中混匀的混合液放入95℃下孵育10min；然后在37°C下孵育2小时后将混合物冷却至室温；（3）向离心管2中混合液中加入2μLT4DNA连接酶,于16°C下孵育3h；（4）将离心管2中混合物在65°C下加热20分钟灭活T4 DNA连接酶；（5）再加入2μL核酸外切酶，在37℃下孵育40min，然后在80℃下保持20min灭活核酸外切酶，即得到环状探针；将最终得到的环状探针溶液保存在4°C；3）取步骤2）制备的的环状探针10μL加入到步骤1）的杂交溶液中；4）向溶液中加入6μL phi29 DNA 聚合酶buffer,2μL phi29 DNA 聚合酶和1μLdNTP混合液，于37℃的恒温箱中孵育40min；所述Aptamer的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述Probe1的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述挂锁探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述连接探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。