[发明专利]一种蛋白质分子量标准的制备方法

摘要

本发明公开了一种蛋白质分子量标准的制备方法，该方法以类弹性蛋白多肽ELP[KV₈F-20n]作为蛋白质分子量标准，其中n为整数或小数，且1≤n≤50，其中ELP[KV₈F-20]的序列如SEQ ID 1所示，ELP[KV₈F-20n]为上述ELP[KV₈F-20]的n次串联序列。本发明的方法利用类弹性蛋白多肽的特有的温度敏感性，通过简单的离心即可得到高纯度的蛋白质，从而制备出蛋白质分子量标准，本发明操作简单，设备要求低，易工业化规模生产。

主权项

一种蛋白质分子量标准的制备方法，其特征在于：以类弹性蛋白多肽ELP[KV₈F‑20n]作为蛋白质分子量标准，其中n为整数或小数，且1≤n≤50，其中ELP[KV₈F‑20]的氨基酸序列如SEQ ID 1所示，ELP[KV₈F‑20n]为上述ELP[KV₈F‑20]的n次串联序列，该方法包括如下步骤：(1)利用递归定向连接方法将不同数量的ELP[KV₈F‑20]的基因序列串联起来，获得ELP[KV₈F‑20]的n倍长度的不同分子量的ELP[KV₈F‑20n]基因序列；(2)将不同分子量的ELP[KV₈F‑20n]基因序列插入到表达载体pET‑22b(+)上，并导入宿主菌中诱导表达，得不同分子量的ELP[KV₈F‑20n]；(3)在一定的盐离子浓度和特定的缓冲溶液条件下，通过控制溶液温度使不同分子量的ELP[KV₈F‑20n]发生相变聚集得到相应的蛋白质溶液，再通过离心纯化得到不同分子量的ELP[KV₈F‑20n]；(4)将不同分子量的ELP[KV₈F‑20n]混合，得非预染型的所述蛋白质分子量标准。