[发明专利]一种柳树带芽茎皮的组织培养方法

摘要

本发明公开了一种柳树带芽茎皮的组织培养方法，包括选枝培芽、外植体选择、培育无菌试管苗、育苗生根、炼苗等步骤。本发明具有很强的实用性，提高了柳树组培繁殖速度和繁殖率，使得繁殖的速度比其他方法快2-3倍，繁殖率高达3-5倍，成活率可保证在99％以上。

主权项

一种柳树带芽茎皮的组织培养方法，其特征在于包括下列步骤：（1）选枝培芽：选取生长健壮、无病虫害的1年生柳树带休眠芽枝条，剪成10cm带有侧芽的茎段，先用洗涤精水漂洗10‑15min，再用自来水冲洗10‑15min，浸泡在20%多菌灵溶液中15‑20min后置于光照培养箱中进行水培，培养条件：温度24‑26℃，光强2000Lx，水培5‑6天，待水培枝条的休眠芽刚刚吐白萌动时为止；（2）外植体选择：用刀片将含芽枝条带木质部切下约1cm，用洗涤精水浸泡20min，用自来水冲洗30min，置超净工作台无菌条件下，用70%的酒精消毒30s，用无菌水冲洗3次，用20%次氯酸钠消毒液消毒20分钟，用无菌水冲洗5次，将外植体表面用经过灭菌处理的滤纸吸干，用镊子挑去芽的外层表皮，用刀片切下与芽连接的茎皮，茎皮不带木质部；（3）培育无菌试管苗：将带芽茎皮接种在诱导丛成芽培养基上，茎皮贴进培养基，芽保持向上，培养基配方：MS+0.4mg/L 6‑BA+0.1mg/L NAA+0.2mg/L KT+0.6mg/L PVP，置于普通日光灯光源的环境下，光照强度为1500‑2000Lx，每日光照时间为20小时，温度25±2℃，相对湿度在65%‑70%，培养约20天，长成2‑3cm的丛成芽的无菌试管苗；（4）育苗生根：将丛生芽分离切成单株，对基部进行剪切，接入到增殖生根培养基中，增殖生根培养基配方：1/2MS+0.2mg/L 6‑BA+0.8mg/L IAA+0.5mg/L NAA+1g/L 活性炭，置于普通日光灯光源的环境下，光照强度为1500‑2000Lx，每日光照时间为20小时，温度25±2℃，相对湿度在65%‑70%，培养约30天，长成6‑8cm的试管生根苗；（5）炼苗：将试管苗开瓶保存2天后，取出试管苗洗净，移栽到含松树皮的基质中，其中松树皮，粒径7‑15mm，保持温度24℃左右，相对湿度75%左右，培养两个星期。