[发明专利]一种拟南芥的嫁接方法

摘要

本发明公开了一种拟南芥的嫁接方法，是以拟南芥野生型无菌种子发芽幼苗为砧木，以拟南芥突变体无菌种子发芽幼苗为接穗的嫁接方法。本发明的方法具有方法易行、操作简单、伤害小、成活率高、成本低等特点，为拟南芥嫁接技术提供了新途径，为林果、蔬菜等植物的品种改良提供理论依据，也为植物嫁接在分子机理等相关理论研究提供了直接的科学研究系统。

主权项

一种拟南芥的嫁接方法，步骤是：1）砧木准备：拟南芥种子无菌环境下经过消毒处理后，播种于1/2 MS固体培养基上，封口后置于4℃培养2‑3天进行春化处理，转入长日照条件下培养，待苗长出子叶后为砧木苗，用于嫁接；2）接穗准备：将拟南芥突变体种子经步骤1）相同的消毒处理和培养，待苗长出子叶后为接穗苗，用于嫁接；其中，步骤1）和2）所述对种子进行消毒处理的方法是：将种子用70%乙醇处理5±2分钟，灭菌水清洗两次后，用2.6% NaClO 消毒处理10±2分钟，用蒸馏水清洗4‑6次；3）无菌环境下嫁接；4）嫁接体培养：嫁接体转入短日照培养，待伤口愈合，长出两片真叶；5）嫁接苗移栽：成活的嫁接苗移栽于培养基质中，浇灌营养液，长日照培养，直至嫁接苗开花结果，收获种子；其中，步骤1）、2）和5）所述长日照条件是：光周期为16小时光照/8小时黑暗，光照条件下的温度为22‑24℃，黑暗条件下的温度为20‑22℃，光强为6000‑8000 lux，相对湿度大于70%；步骤4）所述短日照条件是：光周期为8小时光照/16小时黑暗，光照条件下的温度为22‑24℃，黑暗条件下的温度为20‑22℃，光强为6000‑8000 lux，相对湿度大于70%；步骤5）中所述的培养基质为蛭石；营养液为B5营养基用水稀释3倍后的溶液；其特征在于：步骤3）所述嫁接的方法是：在砧木苗下胚轴的上1/3处用长145 mm的特快型手术剪刀剪断，使地下部保留有2/3的下胚轴作为砧木；在接穗苗下胚轴的上1/3处用长145 mm的特快型手术剪刀剪断，使地上部保留有1/3的下胚轴作为接穗；将接穗和砧木两个伤面的形成层贴合并贴在培养皿沾有水珠的培养皿内壁上，封口。