[发明专利]一种适度延缓植物衰老和提高逆境抗性的融合基因及其应用

摘要

一种适度延缓植物衰老和提高逆境抗性的融合基因及其应用。本发明利用分子生物学技术人工拼接了一个融合基因，命名为WX02，其核酸序列如SEQ ID No.1所示。同时构建由CaMV 35S启动子驱动WX02融合基因表达的双元表达载体，并采用花苞浸泡法转化拟南芥，对所获得的35S‑WX02转基因拟南芥的研究证明，该融合基因的表达对转基因植株的生长发育无任何不利影响，同时可延缓转基因植株的叶片衰老，显著提高其干旱抗性。说明WX02基因具有适度延迟叶片衰老和提高植物逆境抗性的功能，将其转入主要经济作物中，可能获得叶片衰老延缓、逆境抗性增强、产量和品质性状得到改善的转基因作物新品种，具有重要的应用价值。

主权项

一种适度延缓植物衰老和提高逆境抗性的融合基因WX02的应用，其特征在于，所述融合基因WX02，其序列如SEQ ID No.1所示的核酸序列；所述WX02的获取方法，具体操作如下：第一、以拟南芥cDNA为模板，利用PCR方法设计特异引物扩增WX02融合基因的下游部分，同时在扩增用的上游引物中引入WX02融合基因的上游部分，从而获得全长的WX02融合基因片段；第二、回收PCR扩增产物；第三、将上述第二步回收的扩增产物，与pMD18‑T载体在连接酶催化下进行连接反应；第四、将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞；第五、通过抗性筛选，获得该WX02融合基因的阳性TA克隆；其中所设计的WX02融合基因的PCR扩增引物如下，先利用上游引物2和下游引物2扩增，然后以该扩增产物为模板利用上游引物1和下游引物1扩增获得WX02融合基因片段；其中上游引物1中引入了Xba I酶切位点，下游引物1引入了Sac I酶切位点：上游引物1：5’‑TCTAGAATGGGTCTTCCTCTAATGATGGAGAGATCATCAAACAACAACACTAGT‑3’；上游引物2：5’‑GAGAGATCATCAAACAACAACACTAGTATGGTTAAACCCTGTTGGAGAATAGG‑3’；下游引物1：5’‑GAGCTCTCAAGCGTAATCTGGAACATCGTATGGGTAC‑3’；下游引物2：5’‑AACATCGTATGGGTACTCGAGTGATGTTGAATGCATCGGGTATC‑3’；用构建获得由CaMV35S启动子驱动该融合基因表达的双元表达载体，并进行植物转化，从而获得基因组中含有可在植物中组成型表达含有以上所述核酸序列融合基因的转基因植株。