[发明专利]高通量测序文库及其构建方法有效
申请号: | 201510055922.7 | 申请日: | 2015-02-03 |
公开(公告)号: | CN104561362B | 公开(公告)日: | 2017-06-06 |
发明(设计)人: | 蒋智;王大伟;李明洲;李宗文;朱海浩;王苗英;刘运超 | 申请(专利权)人: | 北京诺禾致源科技股份有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/10;C40B50/06;C40B40/06 |
代理公司: | 北京康信知识产权代理有限责任公司11240 | 代理人: | 吴贵明,张永明 |
地址: | 102200 北京市昌平区*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明公开了一种高通量测序文库及其构建方法。该构建方法包括以下步骤S1,从DNA‑蛋白交联复合体中获取DNA片段;S2,利用核酸外切酶对DNA片段进行酶切;以及S3,对酶切后的DNA片段进行文库构建,得到高通量测序文库;其中,核酸外切酶是指作用于双链DNA,具有3’→5’核酸外切酶活性而不具有DNA聚合酶活性的核酸酶。上述文库构建方法,通过用具有3’→5’核酸外切酶活性而不具有DNA聚合酶活性的核酸外切酶替代现有技术中的具有3’→5’核酸外切酶活性且具有DNA聚合酶活性的klenow片段,因而能够将非目的片段中的标记去除得更彻底,使所得DNA片段纯度大大提高,进而提高后续测序数据的有效量。 | ||
搜索关键词: | 通量 序文 及其 构建 方法 | ||
【主权项】:
一种高通量测序文库的构建方法,其特征在于,所述构建方法包括以下步骤:S1,从DNA‑蛋白交联复合体中获取DNA片段;S2,利用核酸外切酶对所述DNA片段进行酶切;以及S3,对酶切后的所述DNA片段进行文库构建,得到所述高通量测序文库;所述步骤S3包括以下步骤:S31,对酶切后的所述DNA片段进行随机打断,得到片段化DNA;S32,对所述片段化DNA进行亲和纯化,得到纯化DNA;S33,对所述纯化DNA依次进行末端修复、加“A”、接头连接,得到带接头DNA;以及S34,对所述带接头DNA进行扩增富集,得到所述高通量测序文库;其中,所述核酸外切酶是指作用于双链DNA,具有3’→5’核酸外切酶活性而不具有DNA聚合酶活性的核酸酶。
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