[发明专利]一种基于分子识别的荧光检测叶酸的方法

摘要

本发明公开了一种基于分子识别的荧光检测叶酸的方法,该方法的步骤包括1)合成识别分子DDO；2)配制磷酸缓冲溶液、叶酸标准溶液和DDO标准溶液；3)测定三维荧光光谱特定条件；4)测定荧光强度；5)得出线性方程；6)根据线性方程计算叶酸的浓度。本发明不需要将叶酸分解就能利用荧光光谱仪检测叶酸的含量，操作过程简便，重复性好，准确性高。

主权项

一种基于分子识别的荧光检测叶酸的方法，包括步骤：1)合成识别分子：将乳清酸与1,12‑二氨基十二烷水溶液混合，常温搅拌反应80～100小时得到混合液，将所述混合液除去水分得到浓缩产物，将所述浓缩产物用无水乙醇洗涤，真空干燥后得到1,12‑二乳清酸基十二烷基二胺盐(DDO)，其反应方程式如下：其特征在于还包括以下步骤:2)配制标准液：称取磷酸二氢钠和氢氧化钠溶于水，用盐酸调节其pH值为7.0～7.8，得到磷酸缓冲溶液；称取叶酸溶解于磷酸缓冲溶液中，得到叶酸标准溶液；称取DDO溶解于磷酸缓冲溶液中，得到DDO标准溶液；3)测定三维荧光光谱特定条件：叶酸激发光波长为400nm，发射光波长为460nm；DDO激发光波长为320nm，发射光波长为390nm；4)测定荧光强度：在DDO浓度为4.0×10‑4mol/L，激发光波长为320nm，发射光波长为390nm，激发电压为800V，激发光源透过孔径均为5.0nm，发射光源透过孔径均为5.0nm的条件下，改变叶酸的浓度，测定不同叶酸浓度下DDO溶液的荧光强度；5)得出线性方程：根据步骤4)得出DDO溶液的荧光强度与叶酸的浓度间具有线性关系，线性方程为F＝3116.99‑28.4759cp，其中F为DDO溶液的荧光强度，cp为叶酸的浓度，相关系数γ为0.9959，检出限为1.25×10‑6mol/L；6)取1mL叶酸标准液，依步骤3)的方法测定荧光值，计算出叶酸的浓度。