[发明专利]固定化脂肪酶的制备方法

摘要

固定化脂肪酶的制备方法，涉及固定化脂肪酶。将菌种活化、培养后上罐发酵得游离酶液；将无水乙醇和去离子水混合，再加入氨水，混合后，加入TEOS，再离心收集白色沉淀，洗涤和干燥，然后超声分散在去离子水中，加入CTAB溶液和Na2CO3，离心收集沉淀后，洗涤和干燥，得到HMSS；将HMSS超声分散在甲苯中，磁力搅拌、冷凝回流后，加入(EtO)3SiPrCN，回流，离心收集产品，洗涤和干燥后，得改性产物HMSS‑CN；再将改性产物在硫酸中回流，离心收集产物，洗涤和干燥后，得产物HMSS‑COOH，再与游离酶液混合，在冰浴下搅拌，离心收集沉淀，并用磷酸钾缓冲液洗涤，冷冻干燥后，即得到固定化脂肪酶。

主权项

固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)将菌种活化、培养后上罐发酵得游离酶液；所述菌种为巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)CALB，已于2015年01月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号为：CGMCC No.10277；2)制备中空介孔SiO2，具体方法如下：将无水乙醇和去离子水混合，再加入氨水，混合后，加入TEOS，再离心收集白色沉淀，第1次洗涤和干燥，然后超声分散在去离子水中，加入CTAB溶液和Na2CO3，离心收集沉淀后，第2次洗涤和干燥，得到HMSS；所述无水乙醇、去离子水、氨水、TEOS、CTAB溶液和Na2CO3的配比为(25～30)ml∶(2～4)ml∶(1～2)ml∶(2～3)ml∶(3.5～4.5)ml∶(0.6～1)g，其中，无水乙醇、去离子水、氨水、TEOS、CTAB溶液以体积计算，Na2CO3以质量计算；3)HMSS的改性将HMSS超声分散在甲苯中，磁力搅拌、冷凝回流后，加入(EtO)3SiPrCN，继续回流，离心收集产品，第1次洗涤和干燥后，得改性产物HMSS‑CN；再将改性产物在硫酸中回流，离心收集产物，第2次洗涤和干燥后，得到产物，命名为HMSS‑COOH；所述HMSS、甲苯、(EtO)3SiPrCN的配比为(1～2)g∶(20～50)ml∶(110～150)μL，其中，HMSS以质量计算，甲苯、(EtO)3SiPrCN以体积计算；4)酶的固定化将HMSS‑COOH与游离酶液混合，在冰浴下搅拌，离心收集沉淀，并用磷酸钾缓冲液洗涤，冷冻干燥后，即得到固定化脂肪酶；所述HMSS‑COOH与游离酶液的配比为(200～500)mg∶(10～30)ml，其中，HMSS‑COOH以质量计算，游离酶液以体积计算。