[发明专利]NRAS基因突变检测体系及其试剂盒

摘要

本发明涉及一种NRAS基因突变检测体系及其试剂盒，包括质控引物探针内标混合液和检测引物探针内标混合液，所述质控引物探针内标混合液包括质控引物对、NRAS基因质控特异探针、内标引物对和内标特异探针；检测引物探针内标混合液有四种，各种检测引物探针内标混合液包括两个针对NRAS基因不同突变位点的检测特异引物对、NRAS基因特异探针、内标引物对和内标特异探针。本发明试剂盒采用多重PCR反应体系分四次检测包括G34A、G34T、G35A、G38A、C181A、A182G、A182T和A183T在内的八个突变位点，有效避免假阴性、批内和批间差及模板质量问题引起的结果偏差，实现高效、低成本、高灵敏度和准确性，适合标准化生产。

主权项

一种NRAS基因突变检测体系，包括质控引物探针内标混合液和检测引物探针内标混合液，其特征在于：所述质控引物探针内标混合液包括质控引物对、NRAS基因质控特异探针、内标引物对和内标特异探针；所述检测引物探针内标混合液包括检测引物探针内标混合液A、检测引物探针内标混合液B、检测引物探针内标混合液C和检测引物探针内标混合液D；所述检测引物探针内标混合液A包括NRAS基因G34A突变检测特异引物对、NRAS基因G34T突变检测特异引物对、NRAS基因12/13密码子特异探针、内标引物对和内标特异探针；所述检测引物探针内标混合液B包括NRAS基因G35A突变检测特异引物对、NRAS基因G38A突变检测特异引物对、NRAS基因12/13密码子特异探针、内标引物对和内标特异探针；所述检测引物探针内标混合液C包括NRAS基因C181A突变检测特异引物对、NRAS基因A182G突变检测特异引物对、NRAS基因61密码子特异探针、内标引物对和内标特异探针；所述检测引物探针内标混合液D包括NRAS基因A182T突变检测特异引物对、NRAS基因A183T突变检测特异引物对、NRAS基因61密码子特异探针、内标引物对和内标特异探针；所述质控引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述质控引物对的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述NRAS基因质控特异探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述NRAS基因G34A突变检测特异引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，其下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；所述NRAS基因G34T突变检测特异引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示，其下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；所述NRAS基因G35A突变检测特异引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示，其下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；所述NRAS基因G38A突变检测特异引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示，其下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；所述NRAS基因C181A突变检测特异引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，其下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述NRAS基因A182G突变检测特异引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示，其下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述NRAS基因A182T突变检测特异引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示，其下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述NRAS基因A183T突变检测特异引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.14所示，其下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述NRAS基因12/13密码子特异探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述NRAS基因61密码子特异探针的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；所述内标引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.15所示，其下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.16所示；所述内标特异探针的核苷酸序列如SEQ ID No.17所示；所述探针均带有荧光基团。