[发明专利]快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法

摘要

本发明公开了一种快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法，依次包括种子的消毒灭菌、无菌苗的获得、子叶、胚轴外植体的获得、愈伤组织和芽的诱导、生根培养、移栽等步骤。本发明方法简便、易操作；与传统接种和培养方法比较，单位时间内菊苣外植体的获得量比普通接种方法提高50%以上，外植体的出愈率可以提高到100%。

主权项

一种快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法，其特征是：依次包括下列步骤：⑴种子的消毒灭菌取菊苣籽粒饱满的种子，用清水中浸泡24h，冲洗干净后，在超净工作台上用75％的酒精消毒30秒，再用10％的NaClO灭菌10min，然后用无菌水冲洗3～4次，用无菌滤纸吸干水分后接种在MS培养基中；（2）无菌苗的获得在25℃暗箱中培养2天，菊苣种子露白后将其转移至光下继续培养，培养室每天光照12h，光照强度为2000lux，培养温度为26±1℃，培养获得7d‑10d苗龄的无菌苗；（3）子叶、胚轴外植体的获得在超净工作台上用镊子将无菌苗从培养基上连根拔起，然后用剪刀分别剪取0.5cm长度的子叶和下胚轴，任其自然下落到培养基上后，剪取结束后，用镊子将外植体均匀摆放在培养基上培养；（4）愈伤组织和芽的诱导将子叶和下胚轴外植体接种在MS+NAA0.5mg/L+6‑BA 2mg/L的培养基上，蔗糖和琼脂浓度分别为30g/L、8g/L；外植体培养10天左右，在切口边缘处形成大量的淡黄色或淡绿色愈伤组织，在绿色愈伤组织上形成绿色的小突起，即为潜在的芽点；随着培养时间的推移，分化出的芽点逐渐分化成肉眼可见的芽；（5）生根培养待幼芽长到2~3cm大小时时，在超净工作台上切下幼芽，将愈伤组织去除干净，将切取的幼芽转入三角瓶中的生根培养基培养；生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg/L；生根培养基培养时，对三角瓶用封口膜封口；（ 6）移栽当菊苣再生植株在生根培养基上根系发达后，将三角瓶去掉封口膜，在组织培养室练苗2~3d，然后取出再生植株，用流水洗净根部的培养基，移栽到盛有已灭菌蛭石的营养钵中，浇灌营养液，营养液为MS液体培养基；一周以后移栽到盛有田间土的营养钵，然后进行正常的田间粗放管理。