[发明专利]一种兽用三联免疫增强剂的制备方法

摘要

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种兽用三联免疫增强剂的制备方法，该三联免疫增强剂具有增强仔猪的机体免疫力、抗菌、杀菌等功效，先制备免疫球蛋白、转移因子和黄芪多糖，然后按照一定比例混合，混匀后，过滤除菌即可，提供了一种兽用三联免疫增强剂及其制备方法，以指导兽医临床科学、合理地使用兽药，促进畜牧业的健康发展。

主权项

一种兽用三联免疫增强剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）制备免疫球蛋白：取抗凝血1L，3000 r/min转速离心20min，获得的上清液和沉淀分别为血浆和血细胞，向血浆中加入生理盐水补足1L，混匀后加入固体硫酸铵饱和度达到20%，室温沉淀2h；在4℃ 条件下，5 000 r/min转速离心10 min，收集上清液；向上清液中再加入固体硫酸铵使饱和度达到35%，在4℃条件下，沉淀过夜；4℃ 5 000 r/min离心10 min，弃上清，沉淀即为免疫球蛋白，用1L生理盐水溶解，将溶液装入透析袋，在4℃条件下，透析除去硫酸铵，用生理盐水调整蛋白浓度至8mg/mL；（2）制备转移因子：取新鲜的猪脾脏，经去脂和去筋膜杂质后，绞碎加入适量生理盐水，用高速组织捣碎机捣碎，所述的高速组织捣碎机的转速为12000 r/min，捣碎次数3次，捣碎频率1 min/次，将匀浆液置于500毫升血清瓶中，于‑20℃条件下冷冻，冻透后，在常温下解冻，如此反复冻融6次以上，最后1次解融的匀浆液经4000 r/min离心30min后收集上清液，将上清液用截留分子量为10 kd的超滤机进行超滤，收集滤出液，即得转移因子溶液，用生理盐水调节多肽浓度至4mg/mL；（3）配制黄芪多糖：称量黄芪多糖10g，溶解于100mL的生理盐水中，溶解后即得10mg/mL的黄芪多糖溶液；（4）配制三联免疫增强剂：按一定体积比例将上述3种溶液混合，免疫球蛋白、转移因子和黄芪多糖3种溶液体积比2:1:1，所用的辅料为占三种混合物体积百分比5‑8%的丙三醇、占三种混合物体积百分比5‑8%的0.1‑1%吐温80、EDTA 1‑10mmol/L，占三种混合物体积百分比0.2%的苯甲酸和占三种混合物体积百分比3%的丙二醇，彻底混匀后过滤除菌并分装入10mL西林瓶。