[发明专利]利用灰平链霉菌StreptomycesgriseoplanusS501固态发酵生产外切菊粉酶的方法

摘要

本发明提供了利用灰平链霉菌Streptomyces griseoplanusS501固态发酵生产外切菊粉酶的方法，属于微生物技术领域，所述方法包括以下步骤将菌株S501冻干粉以无菌水配成菌悬液于选择培养基上在28℃下培养3‑5d，将孢子刮下，置于无菌水中稀释至孢子菌悬液浓度为106cfu/mL，接种于固态发酵培养基，于28℃静止培养3‑6d；待发酵结束后，加入去离子水，振荡提取1h后过滤，将滤液于4℃，转速8000rpm/min离心20min得到含外切菊粉酶的上清液，将上清液按常规冷冻干燥法制得菊粉酶制剂。本发明以麸皮作为固态发酵基质，采用廉价易得的大蒜皮粉作为碳源，诱导菌株S501产外切菊粉酶，外切菊粉酶酶活最高可达到209.63±0.96U/g，克服了现有技术中使用菊粉做碳源的成本高，液态发酵方法耗时耗力，不适合工业生产的缺陷。

主权项

一种利用灰平链霉菌Streptomyces griseoplanus S501固态发酵生产外切菊粉酶的方法，其特征在于，该固态发酵方法包括以下步骤：将菌株S501冻干粉以无菌水配成菌悬液，用无菌签子蘸取适量于选择培养基上，在28℃下培养3‑5d，将孢子刮下，置于无菌水中稀释至孢子菌悬液浓度为106cfu/mL，孢子菌悬液按8.0～12.0％(v/w)的接种量接入固态发酵培养基中，于28℃静止培养3‑6d；待发酵结束后，以干重计，每克固态发酵培养基基质加入5ml去离子水，振荡提取1h，用纱布过滤，将滤液于4℃，转速8000rpm/min离心20min得到含外切菊粉酶的上清液，将上清液按常规冷冻干燥法制得外切菊粉酶；所述的固态发酵培养基基质为麸皮，碳源为大蒜皮粉；所述的固态发酵培养基具体为：固态发酵培养基pH为8.0～9.0，固液比为1:1.4～1.5，于121℃高压灭菌20min；所述固液比即每1g麸皮加入1.4～1.5ml溶液，该溶液具体由NH4NO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O和去离子水组成，每1L去离子水中含NH4NO30.42～0.83g，NaCl0.42g，K2HPO4·3H2O 0.42g，MgSO4·7H2O 0.42g，FeSO4·7H2O 0.008g；大蒜皮粉与固态发酵基质麸皮的质量比为0.048～0.1:1。