[发明专利]CRISPR-Cas9技术构建染色体易位干细胞及动物模型的方法有效
| 申请号： | 201510075127.4 | 申请日： | 2015-02-12 |
| 公开（公告）号： | CN104726494B | 公开（公告）日： | 2018-10-23 |
| 发明（设计）人： | 刘厚奇;蒋俊锋;应其龙;王越;张莉 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第二军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/55;C12N15/11;C12N5/10;A01K67/027;C12Q1/02;A61K49/00 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 赵青 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种染色体易位干细胞模型及动物模型制备方法，主要通过CRISPR/Cas9技术诱导干细胞中特异位点染色体易位发生及细胞模型制备，以及进一步利用胚胎干细胞技术构建携带特异位点染色体易位的动物模型的方法。具体的，通过向干细胞中同时导入Cas9和针对两个目的染色体位点的gRNA，可以人工诱导特异位点的染色体易位，再经过筛选，可以得到携带该染色体易位的细胞模型。而携带该染色体易位的动物胚胎干细胞，还可以进一步通过嵌合体技术得到携带特异位点的染色体易位的动物模型。对于研究染色体易位，融合基因的功能，染色体相互作用的研究，以及药物的筛选评价，都有较大应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | crispr cas9 技术 构建 染色体 易位 干细胞 动物 模型 方法 | ||
【主权项】：
1.一种在小鼠的胚胎干细胞中通过CRISPR‑Cas9技术诱导特异位点的染色体易位的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：A、确定小鼠7号染色体上的GSK3a基因所在位点为chr‑site1，小鼠5号染色体上的CDX2基因所在位点为chr‑site2；根据目标染色体位点chr‑site1、chr‑site2分别设计gRNA的识别序列，标记为gRNA‑1、gRNA‑2；gRNA‑1的设计识别位点为：GATTGGTAATGGCTCATT(SEQ ID NO：1)gRNA‑2的设计识别位点为：GTGAGCTACCTTCTGGACA(SEQ ID NO：2)B、构建表达gRNA‑1、gRNA‑2的表达载体；C、将步骤B得到的表达gRNA‑1、gRNA‑2的表达载体，以及含Cas9基因的表达载体共转染目标干细胞。
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