[发明专利]改造斑马鱼基因组的构建物及改造方法有效
| 申请号： | 201510075155.6 | 申请日： | 2015-02-12 |
| 公开（公告）号： | CN105985982B | 公开（公告）日： | 2019-10-15 |
| 发明（设计）人： | 杜久林;李佳;张白冰 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海生命科学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/89;C12N15/11;C12N15/55;C12N15/53;C12N15/12;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈静 |
| 地址： | 200031 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及改造斑马鱼基因组的构建物及改造方法。首次提供了一种以非同源整合方式将外源基因插入到基因组中的方法，可在不影响内源基因表达的基础上有效插入外源基因并使其正常表达。本发明为高效而特异地进行基因组编辑操作提供了新途径。 | ||
| 搜索关键词： | 改造 斑马 基因组 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种将外源基因插入到斑马鱼基因组中目标基因位点的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)以目标基因3’端包含内含子、外显子、终止子和3’UTR区段作为目的区段，在目的区段的内含子序列中确定一段单导向RNA靶序列；针对目的区段确定左同源臂序列和右同源臂序列，左同源臂序列包含该目的区段的5’端的内含子和外显子直至终止子前的序列，且左同源臂序列中包含所述单导向RNA靶序列，右同源臂序列包含该目的区段的3’端终止子和3’UTR序列；(2)制备供体质粒，其包括以下操作性连接的元件：左同源臂序列，外源基因序列，右同源臂序列；(3)将供体质粒、单导向RNA或能形成所述单导向RNA的DNA、Cas9 mRNA或能形成所述Cas9 mRNA的DNA共转靶细胞，获得基因组中以非同源整合方式插入了外源基因的重组细胞。
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