[发明专利]一个体系同时监测猪场环境中6种病毒污染的多重RT-PCR方法和应用

摘要

本发明提供了用一个体系同时监测猪场环境中6种主要病毒污染的多重RT-PCR方法及应用。该方法的建立是通过对猪瘟病毒(CSFV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)进行引物设计，构建针对这6种病毒的多重RT-PCR反应体系，通过液体撞击采集空气样品，采用超滤离心对病毒进行分离浓缩，建立了猪场环境中主要病毒污染检测方法。该方法可用于监测猪舍和猪场环境中空气、饲料、饮水、器具、粪便和猪群的上述6种病毒污染，为建立猪场环境中主要病毒污染预警机制及主要病毒病防控和净化体系提供了技术支持。

主权项

一个体系同时监测猪场环境中6种病毒污染的方法，其特征在于包括以下步骤：1）引物设计 利用软件在猪瘟病毒(CSFV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV‑2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)保守区进行引物设计；    CSFVF  GCTCCCTGGGTGTTCTAAGTCSFVR  TGCTGTCCTTCTCATGCTCTT    PRRSVF  GGCCAGCCAGTCAATCAGPRRSVR  GGCAAACTAAACTCCACAGTG    JEVF  CAAACTGGCTCTGAAAGGJEVR  TGTCTCAGGTCCATCTACG    PCV‑2F  CAGCACCCTGTAACGTTTGPCV‑2R  AGGAGTACCATTCCAACGG    PPVF  ACATCTAAATATGCCAGAACACG    PPVR  GTTTGCCATGAGTGAGTTAATTT    PRVF  CTCCTTGAGCGTCTTCGTCG    PRVR   CCTTCCTGTCCAACCCCTTC把对应片段连接到载体并转化到大肠杆菌中，获得大量扩增后，按照1：5的比例将保护剂和DNA混合均匀，制成专用marker，作为参照标准；2）多重RT‑PCR的建立 建立了一个体系同时检测上述6种病毒的多重RT‑PCR方法；3）空气样品采集 通过液体撞击法采集猪舍内和猪场环境中空气；用截留分子量为10kD的超滤管超滤离心对病毒进行分离浓缩。