[发明专利]一种脂肪酶的原核表达及应用和固定化方法

摘要

本发明涉及一种脂肪酶的原核表达及应用和固定化方法，属于酶工程及分子生物学应用领域；该脂肪酶Tm1350基因来源于极端嗜热菌，本发明将该基因构建到原核表达载体pET‑28a中，获得重组质粒pET‑28a‑Tm1350，转入宿主细胞E.coli BL 21，诱导重组脂肪酶的表达，然后纯化并鉴定其酶学性质；通过构建高拷贝数的穿梭表达载体pHS‑CotB‑Tm1350，转入枯草芽孢杆菌菌株DB403中，诱导重组孢子产生，随衣壳蛋白CotB的组装，该酶共表达在孢子表面。本发明首次通过孢子表面技术对脂肪酶固定化，该脂肪酶具有很好的热稳定性，耐碱性，甲醇激活性及耐甲醇性，具有很大的工业化应用潜能，如生物柴油的制备；该酶展示在孢子表面，不仅稳定性更好，而且通过简单离心或过滤就可回收利用，具有很好的应用前景。

主权项

一种脂肪酶Tm1350的固定化方法，其特征在于，按照以下步骤进行：（1）构建一个以CotB为锚定蛋白的高拷贝大肠杆菌‑枯草芽孢杆菌穿梭表达载体pHS‑CotB；（2）将脂肪酶Tm1350基因与步骤（1）中的穿梭表达载体相连，得到重组表达载体pHS‑cotB‑Tm1350；（3）将重组表达载体pHS‑cotB‑Tm1350转入宿主菌株枯草芽孢杆菌DB403中，得到孢子表面展示脂肪酶的重组枯草芽孢杆菌；所述脂肪酶Tm1350基因来源于极端嗜热菌海栖热袍菌脂肪酶Tm1350基因，其中脂肪酶Tm1350基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。