[发明专利]一种类转录激活子效应蛋白介导的高效转基因方法

摘要

本发明公开了一种类转录激活子效应蛋白介导的高效转基因方法。采用分子生物学技术构建包含类转录激活子效应蛋白DNA序列和piggyBac转座酶DNA序列的辅助质粒，在体外转录成mRNA；采用显微注射法将该辅助质粒的mRNA与含有外源基因的piggyBac转座子质粒的DNA一起导入到动物的受精卵中，获得外源基因能够稳定遗传和表达的转基因动物；根据标志基因或基因的表达特征筛选出转基因阳性个体；本发明方法可以使piggyBac转座子在TALE‑PBase融合蛋白的作用下高效的插入宿主生物的基因组中，可显著地提高piggyBac转座子介导的转基因效率，为获得转基因动物以及插入诱变等研究提供帮助。

主权项

一种类转录激活子效应蛋白介导的高效转基因方法，其特征在于该方法的步骤如下：1）采用分子生物学技术构建包含类转录激活子效应蛋白DNA序列和piggyBac转座酶DNA序列的辅助质粒，该质粒表达有TALE‑PBase融合蛋白，将该辅助质粒在体外转录成mRNA；辅助质粒采用以下方式构建：先组装如SEQ ID NO.3的TALE序列；在TALE的3’端连接一个PBase序列，与前面的TALE序列在同一个编码框内，用于表达TALE‑PBase融合蛋白，TALE与PBase之间有1个209bp长度的如SEQ ID NO.4的连接序列连接；在TALE 的5’端构建一个如SEQ ID NO.1的SP6原核启动子，还构建了一个如SEQ ID NO.2的核定位序列；2）采用显微注射法将作为转座酶的辅助质粒的mRNA与含有外源基因的piggyBac转座子质粒的DNA一起导入到动物的受精卵中，获得外源基因能够稳定遗传和表达的转基因动物，所述的转基因动物为家蚕；3）根据标志基因或基因的表达特征筛选出转基因阳性个体。