[发明专利]一种桂花幼胚培养方法

摘要

一种桂花幼胚培养方法，涉及桂花（Osmamthus fragrans）通过植物细胞培养技术培养离体胚，以破除桂花种子休眠，实现较高的种子萌发率。本发明以“籽丹”桂未成熟果实为外植体，经过外植体消毒、幼胚培养、生根培养、炼苗移栽等步骤建立了桂花离体幼胚的培养技术体系，以期为建立桂花再生体系、利用基因工程和细胞工程改良桂花品种奠定基础。

主权项

一种桂花幼胚培养方法，其特征在于包括以下步骤：（1）外植体消毒处理：选取桂花饱满健康的未成熟果实，采摘后先在2～4℃条件下进行低温预处理1～5天后用洗洁精水溶液浸泡5～10min，然后用自来水冲洗10～30min,剥去果皮、果肉，将获得的种子先用吐温清水洗1次后用自来水冲洗5～7次，擦干表面水分后在超净工作台中以70%～80%乙醇浸泡5～10s，0.1%升汞溶液消毒8～20min，再用无菌水清洗3～5次后用无菌滤纸擦干后备用;（2）幼胚培养：将步骤（1）处理后种子置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖刀剖开种皮取出幼胚接种于幼胚培养基上进行幼胚培养,接种后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至幼胚萌发;（3）生根培养：将步骤（2）所获得的长出2～3对真叶的幼苗在根颈以下0.6～1.2cm处剪断主根后接种到生根培养基上进行促根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根;（4）炼苗移栽：待幼苗长至6～9cm高后置于自然光照下炼苗5～7天后，洗净根部培养基，移栽至草炭土基质中,一周之内避免阳光照射，并向基质和叶片施用1/4MS大量元素营养液，保持湿度,7天后逐渐撤去遮荫物，并逐步减少营养液施用次数，待幼苗成活后再移栽大田。