[发明专利]一种嗜水气单胞菌四环素类药物耐药基因检测方法在审
| 申请号： | 201510087983.1 | 申请日： | 2015-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN104878081A | 公开（公告）日： | 2015-09-02 |
| 发明（设计）人： | 张丹凤;林淦;胡元庆;陈凡;潘裕添;陈国平 | 申请（专利权）人： | 闽南师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12R1/01 |
| 代理公司： | 厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204 | 代理人： | 李雁翔 |
| 地址： | 363000 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种嗜水气单胞菌四环素类药物耐药基因检测方法，该方法包括如下步骤：(1)收集嗜水气单胞菌活菌体0.5～0.7g，用5～7mL去离子水重悬，反复冻融破碎细胞，离心后收集上清液，得到模板；(2)将该模板与四环素类药物耐药基因检测引物TetA-F、TetA-R、TetC-F、TetC-R、TetG-F和TetG-R共同混合后，进行PCR扩增；(3)步骤(2)的PCR扩增结束后，进行琼脂糖凝胶电泳并送交测序。本发明的检测方法敏感、特异、快速，可以检测极微量的目的基因进行检测，而不需要经过费时的嗜水气单胞菌培养阶段。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 水气 单胞菌 四环素 类药物 耐药 基因 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种嗜水气单胞菌四环素类药物耐药基因检测方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)收集嗜水气单胞菌活菌体0.5～0.7g，用5～7mL去离子水重悬，反复冻融破碎细胞，离心后收集上清液，得到模板；(2)将该模板与四环素类药物耐药基因检测引物TetA‑F、TetA‑R、TetC‑F、TetC‑R、TetG‑F和TetG‑R共同混合后，进行PCR扩增，该PCR扩增的反应体系中包括超纯水、PCR缓冲液、终浓度均为0.25～0.35mmol/L的dNTPs、终浓度为0.5～0.6mmol/L的TetA‑F、终浓度为0.5～0.6mmol/L的TetA‑R、终浓度为0.3～0.4mmol/L的TetC‑F、终浓度为0.3～0.4mmol/L的TetC‑R、终浓度为0.4～0.5mmol/L的TetG‑F、终浓度为0.4～0.5mmol/L的TetG‑R和终浓度为0.01～0.02U/uL的TaqDNA聚合酶，其中TetA‑F、TetA‑R、TetC‑F、TetC‑R、TetG‑F和TetG‑R分别如SEQ ID 1、SEQ ID 2、SEQ ID 3、SEQ ID 4、SEQ ID 5和SEQ ID 6，上述PCR缓冲液的10倍母液中包括50～55mM氯化钠、pH8.3的10mMTris‑HCl、0.01～0.02％甘油和0.01～0.02％硫酸铵，25～30mM MgCl2；(3)步骤(2)的PCR扩增结束后，进行琼脂糖凝胶电泳并送交测序。
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