[发明专利]一种黄檗组织培养快繁方法

摘要

本发明公开了一种黄檗组织培养快繁方法，涉及利用植物组织培养的方式来繁殖黄檗（Phellodendron amurense rupr.）种苗以解决其传统繁殖方式存在繁殖系数低的问题。本发明以黄檗新梢茎尖为外植体，经过外植体处理、接种、培养、继代、生根及移栽等过程建立了黄檗组织培养快繁体系，既能解决目前黄檗植物资源的短缺问题，又能满足市场对黄檗药材的大量需求。

主权项

一种黄檗组织培养快繁方法，其特征在于包括以下步骤：（1）愈伤组织诱导：采集具有10年以上树龄的健壮黄檗植株新梢茎尖，用软毛刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗，于0.1%高锰酸钾溶液浸泡10～40s，自来水冲洗1～3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒3～8min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后剪成长5mm大小的茎尖并接种到诱导培养基进行愈伤组织诱导,接种后先在25～28℃条件下全暗培养5～15天，然后置于每天光照12～17小时，光照强度为1500～3000lx，直至诱导形成愈伤组织;（2）增殖培养：将步骤（1）诱导培养得到的愈伤组织切割成0.5cm3大小并接种于增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照13～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的愈伤组织;（3）分化培养：将步骤（1）或（2）诱导培养得到的愈伤组织切割成0.5cm3大小并接种于分化培养基上进行丛生芽诱导培养,接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照13～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成丛生芽;（4）生根培养：将步骤（3）过程获得的丛生芽切割成2.0～3.0cm带芽茎段并接种到生根培养基上进行诱导培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照13～15小时，光照强度为3000～4000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根;（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高3.0～4.0cm的根系发达且叶片展开的健壮试管苗在培养室内敞口炼苗5～10天，洗净在根系上附着的培养基,移栽到腐殖土:园土:腐熟鸡粪＝5:3:2的混合基质中，保持湿度90%以上，以塑料薄膜覆盖5～10天后揭去，30天后统计成活率。