[发明专利]一种利用鱼皮制备用于治疗伤口愈合的活性肽的方法有效
申请号: | 201510092619.4 | 申请日: | 2015-03-02 |
公开(公告)号: | CN104726526B | 公开(公告)日: | 2017-12-19 |
发明(设计)人: | 洪鹏志;刘唤明;杨萍;周春霞;孙力军;张鹏;邓楚津 | 申请(专利权)人: | 广东海洋大学 |
主分类号: | C12P21/06 | 分类号: | C12P21/06;C12P21/00;C12R1/125 |
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地址: | 524088 *** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明公开了一种利用鱼皮制备用于治疗伤口愈合的活性肽的方法,包括以下主要步骤将新鲜的鱼皮剪成碎片;剪碎后的鱼皮加入到发酵罐中,并添加营养物和水作为培养基;发酵罐中培养基灭菌冷却后接入能产抗菌脂肽的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HL‑1进行液态好氧发酵;发酵结束后发酵液先进行灭酶,接着通过离心分离去除沉淀得到上清液,上清液再先后进行膜分离、真空浓缩和喷雾干燥后制备成用于治疗伤口愈合的活性肽成品。本发明方法制备的用于治疗伤口愈合的活性肽富含促进伤口愈合肽与抗菌脂肽,不但可以促进伤口愈合,而且还可以有效预防伤口的感染。本发明方法制备的活性肽产品既可以喷剂或凝胶剂型直接给药用于治疗伤口愈合,也可以口服的形式治疗伤口愈合,有着良好的应用前景。 | ||
搜索关键词: | 一种 利用 鱼皮 制备 用于 治疗 伤口 愈合 活性 方法 | ||
【主权项】:
一种利用鱼皮制备用于治疗伤口愈合的活性肽的方法,其特征在于:该方法包括如下步骤:(1)将斜面保藏的能产抗菌脂肽的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HL‑1接入到灭菌后冷却的LB液体培养基中,于37 ℃、150r/min培养16h,制备成枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HL‑1种子液备用;(2)将新鲜的鱼皮剪成(0.5~1.5)cm×(0.5~1.5)cm的碎片备用;(3)将步骤(2)制备的剪碎鱼皮加入到发酵罐中,并向发酵罐中加入水和营养物,混匀后得到发酵培养基;(4)将步骤(3)获得的发酵罐中的培养基于115℃灭菌20min;(5)将灭菌后的发酵罐中的培养基冷却至室温,然后接入步骤(1)所制备的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HL‑1种子液;(6)发酵过程的控制:发酵温度为30℃~32℃,无菌空气通入量为0.5vvm~2.5vvm,发酵罐的转速为150rpm~450rpm,发酵时间为35~45h;(7)成品处理:发酵结束后,发酵液升温至90℃保温灭酶5min;灭酶后的发酵液冷却至室温后,于8000r/min离心10min,去掉沉淀,收集上清液;通过膜分离截留上清液中分子量在3500Da以下的活性肽组分;膜分离截留液再进行真空浓缩和喷雾干燥后,即可得到用于治疗伤口愈合的活性肽成品;所述步骤(1)中所用的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HL‑1在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.10379;所述步骤(3)中鱼皮的加入量以添加的鱼皮的质量占水总质量百分比计,为5%~10%;所述步骤(3)中营养物为葡萄糖、医药级氯化钾、医药级氯化镁和医药级磷酸氢二钾所组成的混合物;所述步骤(3)中的营养物的加入量以添加的营养物的质量占水总质量百分比计,分别为:葡萄糖0.01%~5%,医药级氯化钾0.01%~5%,医药级氯化镁0.01%~5%,医药级磷酸氢二钾0.01%~5%。
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