[发明专利]一种复合光合细菌制剂的制备方法

摘要

本发明提供了一种复合光合细菌制剂的制备方法，主要是提供一种保存时间长，快速降解养殖水体中氨态氮，硫化氢等有害物质的复合光合细菌制剂的制备方法。采用紫硫光合细菌中的桃红荚硫菌与紫色非硫光合细菌中的万尼氏红微菌经种子活化培养，种子培养，厌氧发酵罐光照培养等培养步骤，得到桃红荚硫菌与万尼氏红微菌的高浓度复合光合细菌制剂，该复合光合细菌制剂可以在水生和海生环境中快速降解水体中氨态氮，硫化氢，从而送减少或消除水体氨态氮，硫化氢以提高水生和海生动物的产量和/或质量。

主权项

一种复合光合细菌制剂的制备方法，其特征在于：采用紫硫光合细菌中的桃红荚硫菌菌种与紫色非硫光合细菌中的万尼氏红微菌按以下步骤进行培养：A、桃红荚硫菌半固体种子活化培养：将桃红荚硫菌种穿刺在半固体桃红荚硫菌培养基中，25‑30℃光照培养 7‑10 天，待穿刺的菌线变红并长出菌苔，即可为活化的桃红荚硫菌种；B、万尼氏红微菌平板活化：将万尼氏红微菌菌种在平板上划线活化，温度 25‑35℃活化培养 3‑5 天，挑取大个菌落作为活化种子；C、桃红荚硫菌种子培养：将活化的菌种接种至桃红荚硫菌种子液体培养基中，温度25‑35℃，光照强度为：1000‑3000lux，光照厌氧培养 7‑10 天，检测种子的 OD650 ≥1.2，活菌数≥ 6亿 cfu/mL即为种子培养液；D、万尼氏红微菌种子培养：将挑取大个万尼氏红微菌菌落作为活化种子接种到万尼氏红微菌种子培养基中，温度 25‑35℃，光照强度为：1000‑3000lux，光照静置培养 3‑5 天，检测种子的 OD660 ≥1.2，活菌数≥8亿 cfu/mL即为种子培养液；E、发酵培养：将桃红荚硫菌种子培养液与发酵培养基以 1 ：3‑1 ：5 的接种量接种，同时将万尼氏红微菌种子培养液与发酵培养基按 1 ：6‑1 ：10 的接种量接入，在光照培养罐中厌氧培养，培养温度 25‑35℃，光照强度为：1000‑4000lux，搅拌速度为 120 转/分钟，待培养至第三天，开始流加 300 g/L 的硫代硫酸钠至硫代硫酸钠的浓度至 1‑3 g/L，继续培养 4‑5天，待检测其OD650 ≥7，活菌数≥60亿cfu/mL，其中桃红荚硫菌不低于25亿cfu/mL，万尼氏红微菌不低于 30 亿 cfu/mL，即可放罐，灌装，包装成品；所述的半固体桃红荚硫菌培养基为：硫酸铵 0.8‑2.0g/L，磷酸二氢钾0.5‑1g/L，二水氯化钙0.05‑0.2g/L，氯化镁0.1‑0.5g/L，琥珀酸钠1‑3 g/L，醋酸钠2‑5g/L，九水硫化钠0.1‑1g/L，琼脂 8‑10g/L，氯化钠 0.5‑4g/L，121℃灭菌 15 分钟，用醋酸调 pH 至 7.0‑7.2,其中九水硫化钠先配制成 0.1g/mL 单独灭菌；所述的桃红荚硫菌种子液体培养基为：硫酸铵 0.8‑2.0g/L，磷酸二氢钾 0.5‑1g/L，二水氯化钙 0.05‑0.2g/L，氯化镁 0.1‑0.5g/L，醋酸钠 2‑10 g/L，琥珀酸钠 1‑3g/L，九水硫化钠 0.1‑1g/L，氯化钠 0.5‑4g/L，121℃灭菌 15 分钟，用醋酸调 pH 至 7.0‑7.2，其中九水硫化钠先配制成 0.1g/mL 单独灭菌；所述的万尼氏红微菌种子液体培养基为: 硫酸铵0.8‑2.0g/L，磷酸二氢钾0.5‑1g/L，二水氯化钙 0.05‑0.2g/L，氯化镁 0.1‑0.5g/L，醋酸钠 2‑10 g/L，琥珀酸钠 1‑3g/L，氯化钠 1‑2g/L，121℃灭菌 15 分钟，用灭菌醋酸调 pH 至 6.0‑6.2；所述的万尼氏红微菌平板固体培养基为万尼氏红微菌种子液体培养基加入 20 g/L 的琼脂形成的；所述的发酵培养基：硫酸铵 1.8g/L，磷酸二氢钾 0.5g/L，二水氯化钙 0.1g/L，氯化镁 0.2g/L，醋酸钠 6 g/L，琥珀酸钠 4g/L，氯化钠 2g/L，121℃灭菌 15 分钟，用醋酸调 pH 至6.2‑6.4；所述桃红荚硫菌种保藏在中国普通微生物菌种中心，编号为 CGMCC NO.10344；所述万尼氏红微菌种从美国微生物菌种中心购置，编号为 ATCC 17100。