[发明专利]微杆菌来源的桃胶多糖裂解酶及其分离纯化方法与应用

摘要

本发明公开了一种微杆菌来源的桃胶多糖裂解酶及其分离纯化方法与应用。本发明通过对微杆菌A5驯化后发酵培养，对发酵上清用硫酸铵沉淀，将沉淀物复溶后依次用苯基琼脂糖凝胶6FF柱和Toyopearl DEAE-650S柱纯化，得到微杆菌来源的桃胶多糖裂解酶。该桃胶多糖裂解酶能有效分解桃胶，因此，其能用于分解桃胶，得到功能性低聚糖。

主权项

一种微杆菌来源的桃胶多糖裂解酶的分离纯化方法，其特征在于包括如下步骤：(1)菌种的驯化：①第一次驯化：将微杆菌A5种子液接种到含有质量百分比2％桃胶的LB培养基中，于摇床中培养至桃胶溶解，得到第一次驯化液；②第二次驯化：将第一次驯化液接种到含有质量百分比4％桃胶的LB培养基中，于摇床中培养至桃胶溶解，得到第二次驯化液；③第三次驯化：将第二次驯化液接种到含有质量百分比6％桃胶的LB培养基中，于摇床中培养至桃胶溶解，得到第三次驯化液；④第四次驯化：将第三次驯化液接种到含有质量百分比8％桃胶的LB培养基中，于摇床中培养至桃胶溶解，得到第四次驯化液；⑤第五次驯化：将第四次驯化液接种到含有质量百分比10％桃胶的LB培养基中，于摇床中培养至桃胶溶解，得到驯化好的种子液；(2)发酵培养：将驯化好的种子液接种到发酵培养基中，于摇床中培养至桃胶完全溶解；发酵培养基为含有质量百分比6％桃胶的LB培养基，初始pH值为6；(3)分离纯化：①将发酵液离心，去除菌体，取上清；②在上清中加入硫酸铵至饱和，于4℃静置过夜；离心收集沉淀，随后用磷酸缓冲液将沉淀复溶；接着用磷酸缓冲液进行透析，期间更换磷酸缓冲液数次直至透析完全；透析结束后，透析液离心除去不溶杂蛋白，收集上清液待纯化；③将步骤②得到的上清液上样到苯基琼脂糖凝胶6FF柱中，收集第二个穿柱峰；④对第二个穿柱峰上样到Toyopearl DEAE‑650S柱中，接着用磷酸缓冲液进行平衡，而后再用0.6M NaCl溶液进行洗脱，收集第一个洗脱峰；⑤将第一个洗脱峰透析后冻干，得到桃胶多糖裂解酶。