[发明专利]一种利用蛋白IHF构建克隆载体的方法有效
| 申请号： | 201510104184.0 | 申请日： | 2015-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN105039375B | 公开（公告）日： | 2019-02-05 |
| 发明（设计）人： | 戚智青 | 申请（专利权）人： | 戚智青 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/70 |
| 代理公司： | 成都天汇致远知识产权代理事务所(普通合伙) 51264 | 代理人： | 韩晓银 |
| 地址： | 美国北卡罗来纳*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用蛋白IHF构建克隆载体的方法，通过对待连接的DNA片段设计引物，并引入DNA同源同组序列，在分别进行扩增，扩增产物和IHF混合，利用传统的转化方法在大肠杆菌中进行转化和克隆，得到重组DNA质粒。本发明方法不依赖于任何重组酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，用同源重组的方法和IHF蛋白一起完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单，PCR产物一步定向克隆，目的片段与载体同源重组连接，常温反应时间短至10分钟，阳性率高达95％以上。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 蛋白 ihf 构建 克隆 载体 方法 | ||
【主权项】：
1.一种利用蛋白IHF构建克隆载体的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)设计引物：对至少两个待连接的DNA片段设计引物；2)根据酶切或者PCR反应得到待连接的线性化载体；3)对至少两个待连接的DNA片段之间引入DNA同源重组序列；4)利用IHF蛋白进行同源重组转化；5)在大肠杆菌中进行转化和克隆，得到重组DNA质粒。
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