[发明专利]一种无盐无有机溶剂纯化技术制备透明质酸钠的方法

摘要

本发明涉及到一种无盐无有机溶剂纯化技术制备透明质酸钠的方法。微生物发酵制备透明质酸钠发酵液，通过发酵液的快速升温处理和过滤、快速降温后加入活性炭吸附和过滤、超滤、无盐状态下低浓度除菌过滤、动态冷冻干燥工艺制备无菌透明质酸钠原料。本发明的优点是：通过纯化和动态冷冻干燥技术制备的透明质酸钠原料干粉的细菌内毒素可以达到0.05EU/mg，分子量可以达到200万道尔顿以上；同时采用快速升降温处理、无盐状态下低浓度除菌过滤和动态冷冻干燥技术可以减去传统工艺中大量的无机盐和有机溶剂的使用，一方面降低生产成本，减少高浓度无机盐对大规模生产的不锈钢设备的腐蚀；同时减少透明质酸钠植入人体后因有机溶剂带来的刺激性和过敏，提高透明质酸的生物安全性。

主权项

1.一种无盐无有机溶剂纯化技术制备透明质酸钠的方法，其特征在于：将能分泌透明质酸的细菌在培养基中和适宜的培养条件下进行培养发酵产生透明质酸，将得到的透明质酸钠发酵液经纯化处理、除菌过滤、浓缩、动态冷冻干燥制备透明质酸钠无菌原料粉；其中，所述纯化处理为将透明质酸钠发酵液快速升温至50‑90℃，维持5‑10分钟，使细菌荚膜和菌体分离、使培养基蛋白质变性，烧结钛棒过滤器过滤；在滤液中加入冷的注射用水将发酵液快速冷却至室温；将滤液用活性炭吸附，0.45μm聚醚砜滤芯进行精滤，去除多种杂质；对精滤液进行超滤，对透明质酸滤液进行进一步去除蛋白质、无机盐、细菌内毒素并且稀释制品；其中，所述超滤用截留分子量在5万Da的滤膜进行超滤；所述除菌过滤为用0.22μm聚醚砜滤芯的过滤器对上述超滤液进行除菌过滤压入常温减压设备中，除菌过滤压力为0.18mPa；所述浓缩为采用常温、减压浓缩技术在常温、减压至真空度为‑30kPa将透明质酸钠浓缩至浓度为2g/L～5g/L；透明质酸钠浓缩液在动态低温冷冻设备中，通过动态冷冻技术在设备夹套温度‑5℃～5℃，边搅拌边抽真空制备无菌透明质酸钠浓缩液的冰晶；对冰晶进行通过边搅拌边真空干燥制备透明质酸钠无菌原料干粉，搅拌速度为50～200rpm、真空度为‑30kPa、干燥时间36～72h、夹套升温至25℃～45℃；所选细菌为马疫链球菌。