[发明专利]基于高通量RNAi筛选HIV-1活性的决定因子的方法在审
| 申请号： | 201510107692.4 | 申请日： | 2015-03-12 |
| 公开（公告）号： | CN106032550A | 公开（公告）日： | 2016-10-19 |
| 发明（设计）人： | 卢洪州;蒋卫民 | 申请（专利权）人： | 上海市公共卫生临床中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/66;C12Q1/02;C12N15/867 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 201508 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属分子生物学技术领域，具体涉及基于高通量RNAi筛选HIV-1活性的决定因子的方法。本发明针对474个激酶的shRNA文库高通量RNAi筛选技术在HEK293T中稳定表达HIV-1 LTR-hRluc/HSVTK-hLuc荧光素酶双重报告质粒，hRluc表达荧光强度的HIV-1 LTR相对转录活性除以hLuc的荧光强度，获得由激酶参与的HIV-1 LTR调节转录活性；本发明的方法，其针对人激酶基因，进行功能性沉默筛查，寻找与HIV复制相关宿主因子，为进一步理解HIV与宿主之间的相互作用，以及寻找抗HIV感染的潜在治疗靶点提供了有价值的参考依据。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 通量 rnai 筛选 hiv 活性 决定 因子 方法 | ||
【主权项】：
基于高通量RNAi筛选HIV‑1活性的决定因子的方法，其特征在于，其包括步骤：(1)制备人激酶(Kinase)shRNA慢病毒文库；(2)筛选：慢病毒文库感染293T HIV 5'LTR‑luciferase稳定株，感染后96h进行luciferase检测；(3)数据分析，确定阳性基因；(4)有效shRNA靶点确认：独立包装阳性基因的4个shRNA慢病毒，Luciferase和qPCR实验确定有效shRNA靶点；(5)选取阳性基因进行功能研究。
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