[发明专利]一种检测水中叠氮根离子或氰离子的方法

摘要

本发明提供了一种检测水中叠氮根离子或氰离子的方法，所述方法利用卤醇脱卤酶催化水中的叠氮离子或氰离子与环氧化物反应，生产对应的4‑叠氮‑3‑羟基丁醇或4‑氰基‑3‑羟基丁醇，根据标准曲线，用气相色谱定量分析生成的4‑叠氮‑3‑羟基丁醇或4‑氰基‑3‑羟基丁醇含量，进而确定样品中叠氮离子或氰离子的浓度；本发明方法准确性好，可以检测叠氮离子和氰离子的最低浓度分别为0.1mM和0.3mM；同时，该发明方法重现性好、灵敏度高，其测定的叠氮离子和氰离子浓度的标准曲线的R2分别为0.997和0.995，该发明方法可用于环境污水，工业废水以及饮用水等各种样品中的叠氮离子和氰离子的浓度测定。

主权项

一种检测水中叠氮根离子或氰离子的方法，其特征在于所述方法为：以含卤醇脱卤酶编码基因的重组基因工程菌经诱导培养获得的湿菌体超声破碎后的上清液为催化剂，以环氧化物为助剂，以待测水样作为原料，在40～45℃、500rpm条件下反应30～60min，取反应液用乙酸乙酯萃取，取上层有机相经无水硫酸钠干燥后采用气相色谱检测4‑叠氮‑3‑羟基丁醇或4‑氰基‑3‑羟基丁醇峰面积，根据以4‑叠氮‑3‑羟基丁醇或4‑氰基‑3‑羟基丁醇峰面积为纵坐标、以叠氮化钠或氰化钠浓度为横坐标制作的叠氮化钠标准曲线或氰化钠标准曲线，确定待测水样中叠氮根离子或者氰离子的浓度；所述催化剂的用量以含卤醇脱卤酶编码基因的重组基因工程菌经超声破碎前湿菌体重量计为5～20mg/mL待测水样，环氧化物的用量为0.05～0.2mol/L待测水样；所述环氧化物为环氧丁烷或环氧辛烷；所述气相色谱检测条件为：采用日本岛津气相GC‑14，色谱柱Astec CHIRALDEXTM G‑TA，载气为氦气，分流比为20:1，进样口和检测器的温度均为220℃，GC程序为120℃保留5min，5℃/min升温至140℃，保留2min；所述标准曲线按如下方法制备：用蒸馏水配制0.2～2.0mM的叠氮化钠水溶液，分别向2mlEP管中加入500μl不同浓度的叠氮化钠水溶液，450μl环氧丁烷溶液和50μl卤醇脱卤酶粗酶液，在40℃，500rpm，反应30min，分别向EP管中加入1ml乙酸乙酯进行萃取，取上层有机相800μl，经无水硫酸钠干燥后采用气相检测4‑叠氮‑3‑羟基丁醇的峰面积，以叠氮化钠浓度为横坐标，以4‑叠氮‑3‑羟基丁醇的峰面积为纵坐标，获得叠氮化钠标准曲线；所述卤醇脱卤酶粗酶液为卤醇脱卤酶经发酵培养获得的湿菌体超声破碎后的上清液，所述粗酶液的浓度以超声破碎前湿菌体重量计为0.1g/ml；所述环氧丁烷溶液是用200mM、pH 7.5的PBS缓冲液配制的200mM环氧丁烷溶液，氰化钠标准曲线的制作同叠氮化钠标准曲线。