[发明专利]一种鸡传染性支气管炎病毒抗原及其制备方法

摘要

本发明属于家禽疫苗技术领域，具体涉及一种用于鸡传染性支气管炎病毒的血凝或血凝抑制试验的鸡传染性支气管炎病毒抗原及其制备方法。包含病毒液和辅剂，所述病毒液为呼吸型IBV‑M41株、腺胃型IBV‑YBX株或肾型IBV‑T株毒种的病毒液。所述辅剂为明胶、蔗糖、聚乙二醇、甘露寡糖或壳聚糖的任一种稳定剂。本发明的传染性支气管炎血凝抗原特异性强，只对传染性支气管炎阳性血清反应呈阳性，对新城疫、禽流感和减蛋综合征阳性血清反应均呈阴性。用本发明的呼吸型IBV‑M41株、腺胃型IBV‑YBX株或肾型IBV‑T株毒种加稳定剂后2～8℃保存5年效价仍在8Log2及以上，稳定性良好。

主权项

一种鸡传染性支气管炎病毒抗原，包含病毒液和辅剂，其特征在于：所述病毒液为腺胃型IBV‑YBX株或肾型IBV‑T株毒种的病毒液；所述辅剂为明胶、蔗糖、聚乙二醇、甘露寡糖或壳聚糖的任一种稳定剂；该鸡传染性支气管炎病毒抗原用于鸡传染性支气管炎病毒的血凝或血凝抑制试验；该鸡传染性支气管炎病毒抗原的制备方法具体步骤如下:1)将病毒毒种分别用无菌生理盐水100倍稀释，经尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚，每胚0.1ml，置37℃鸡胚孵化箱孵化，24小时照胚1次，弃去死胚；继续孵化至48小时，不论死亡与否，全部取出，置4℃冰箱冷却；2)收集尿囊液，3000rpm离心30分钟，取上清；3)将上清装入40ml离心管中，经30000rpm，4℃离心3小时；4)弃去上清，每管各加入1M pH6.5的Tris‑HCL缓冲液，进行吹打，混匀，将病毒混悬液收集于一管内；5)取病毒混悬液加入2U/ml卵磷脂酶C等量混合；6)将病毒混合物37℃水浴2小时，每隔15分钟振荡混匀；最后4℃过夜；7)将步骤6)的混合物进行稀释，之后加入浓度为1％的硫柳汞，边加边混匀，硫柳汞终浓度为0.01％，混匀后4℃保存。