[发明专利]瘦素在诱导胚胎干细胞分化为造血干/祖细胞中的用途及其应用

摘要

本发明公开了瘦素在诱导胚胎干细胞分化为造血干/祖细胞中的用途及其应用，包括：用于诱导胚胎干细胞分化为造血干/祖细胞的试剂盒、利用前述的试剂盒制备造血干/祖细胞的方法和制备造血干/祖细胞的系统。实验发现，瘦素可以显著提高胚胎干细胞向造血干/祖细胞分化的效率，提高分化细胞的造血集落形成能力，诱导效果好且稳定。

主权项

1.一种用于诱导胚胎干细胞分化为造血干/祖细胞的试剂盒，其特征在于，包括：第一培养基，所述第一培养基为添加了瘦素的AdvancedRPMI 1640培养基；以及第二培养基，所述第二培养基为添加了瘦素的Stempro 34培养基，第三培养基，所述第三培养基为添加了1‑硫代甘油、维生素C磷酸酯、谷氨酰胺的Advanced RPMI 1640培养基，第四培养基，所述第四培养基为添加了1‑硫代甘油、维生素C磷酸酯、谷氨酰胺、重组激活素A、重组人骨形成蛋白4、重组人碱性成纤维生长因子和CHIR99021的Advanced RPMI 1640培养基，其中，所述第一培养基中、第二培养基中的瘦素的浓度为10‑300ng/ml，所述第一培养基进一步添加了1‑硫代甘油、维生素C磷酸酯、谷氨酰胺、重组人骨形成蛋白4、重组人碱性成纤维生长因子和重组人血管内皮生长因子，所述第一培养基中，所述1‑硫代甘油的浓度为4×10‑4M；所述维生素C磷酸酯的浓度为50μg/ml；所述谷氨酰胺的浓度为2mM；所述重组人骨形成蛋白4的浓度为20ng/ml；所述重组人碱性成纤维生长因子的浓度为20ng/ml；以及所述重组人血管内皮生长因子的浓度为50ng/ml；所述第二培养基进一步添加了1‑硫代甘油、维生素C磷酸酯、谷氨酰胺、重组人干细胞因子、重组人白介素3、人FMS样酪氨酸激酶3配体和CHIR99021；所述第二培养基中，所述1‑硫代甘油的浓度为4×10‑4M；所述维生素C磷酸酯的浓度为50μg/ml；所述谷氨酰胺的浓度为2mM；所述重组人干细胞因子的浓度为50ng/ml；所述重组人白介素3的浓度为50ng/ml；所述人FMS样酪氨酸激酶3配体的浓度为50ng/ml；以及所述CHIR99021的浓度为3μM；所述第三培养基和第四培养基中，所述1‑硫代甘油的浓度为4×10‑4M；所述维生素C磷酸酯的浓度为50μg/ml；所述谷氨酰胺的浓度为2mM；所述重组激活素A的浓度为25ng/ml；所述重组人骨形成蛋白4的浓度为25ng/ml；所述重组人碱性成纤维生长因子的浓度为25ng/ml；以及所述CHIR99021的浓度为3μM，其中，所述胚胎干细胞均来自商业化的永生化细胞株。