[发明专利]基于吗啉寡核苷酸功能化磁性微球的高灵敏度DNA荧光分析方法

摘要

本发明公开了一种通过引入吗啉寡核苷酸来对特异性DNA片段进行检测的高灵敏度、高选择性的荧光分析方法。将共价连接到磁性微球表面的吗啉寡核苷酸作为捕获探针，与较长的目标DNA片段杂交后，目标DNA的未杂交段再与末端修饰生物素的信号DNA杂交，利用链霉亲和素与生物素的结合作用，将碱性磷酸酶引入到信号探针DNA末端，碱性磷酸酶催化L‑抗坏血酸2‑磷酸盐生成L‑抗坏血酸，L‑抗坏血酸再还原刃天青形成强荧光的试卤灵，荧光强度与目标DNA呈相关关系，通过荧光分析的方法实现对DNA片段的高灵敏度、高选择性检测，可应用于分子识别、临床诊断、环境监测及食品安全等领域中DNA样品的检测。

主权项

1.一种基于吗啉寡核苷酸功能化磁性微球的高灵敏DNA荧光分析方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将羧基化的磁性微球悬浮在PBS缓冲液中，加入吗啉寡核苷酸、NHS和EDC的PBS混合溶液，反应结束后进行磁分离并用PBS缓冲液清洗多次；步骤二、将步骤一得到的吗啉功能化的磁性微球复悬在TE缓冲液中，加入目标DNA片段，杂交结束后进行磁分离并用TE缓冲液清洗多次；步骤三、将步骤二得到的杂交后的磁性微球复悬在TE缓冲液中，加入生物素标记的信号探针DNA片段，杂交结束后进行磁分离并用TE缓冲液清洗多次；步骤四、再将步骤三得到的二次杂交后的磁性微球复悬在Tris‑HCl缓冲液中，加入SA‑ALP，反应结束后进行磁分离并用Tris‑HCl缓冲液清洗多次；步骤五、将步骤四得到的连接碱性磷酸酶的磁性微球复悬在Tris‑HCl缓冲液中，加入L‑抗坏血酸2‑磷酸盐、刃天青及MgCl2溶液，反应结束后测荧光光谱。