[发明专利]利用绿色木霉制备黄芪甲苷的方法

摘要

本发明涉及利用绿色木霉制备黄芪甲苷的方法。本发明的方法利用绿色木霉进行对中药黄芪进行微生物转化，在一定发酵培养条件下实现有效成分黄芪甲苷的富集。然后将生物法得到的黄芪甲苷粗提物，利用大孔吸附树脂HPD100进行分离纯化，进一步利用硅胶柱层析及甲醇重结晶等方法纯化最终得到纯度98％以上的黄芪甲苷。本方法的目的在于克服原料成本高，黄芪甲苷产率低，工艺复杂污染严重等缺点，适合大规模生产不同纯度的黄芪甲苷。

主权项

利用绿色木霉制备黄芪甲苷的方法，以中药黄芪为原料，依次包括如下步骤：A．中药黄芪利用绿色木霉进行发酵绿色木霉冻干粉活化后制成试管斜面保藏，取绿色木霉试管斜面加无菌水制成孢子悬浮液，接种于液体培养基的温度26℃，摇床转速为120r/min培养48h得到种子液；取种子液加入到发酵培养基中温度26℃，摇床转速为120r/min培养120h得到发酵液；B．发酵液中黄芪甲苷的分离提取上述发酵液混合后浓缩过滤得到上样液，经HPD100树脂柱分离，洗脱杂质后洗脱得到产品经正丁醇萃取得到得到产品纯度在10%以上；硅胶柱层析纯化用洗脱剂氯仿‑甲醇‑水体积比13:8:2的下层溶液进行洗脱；步骤A中发酵培养基配方为10g/L黄芪粉末，5g/L酵母粉，（NH4)2SO4 2.8g/L，KH2PO4 4g/L，MgSO4•7H2O 0.9g/L，无水CaCl2 0.9g/L，吐温80 1ml/L，调节pH为5.0。