[发明专利]一种基于树干毕赤酵母合成菌株发酵木糖生产富马酸的构建方法有效
| 申请号： | 201510112939.1 | 申请日： | 2015-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN104694586B | 公开（公告）日： | 2018-03-30 |
| 发明（设计）人： | 闻建平;魏亮;刘蛟;齐海山 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12P7/46;C12R1/84 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所12201 | 代理人： | 王丽 |
| 地址： | 300072 天*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明提供一株基于树干毕赤酵母合成菌株发酵木糖生产富马酸的构建方法。采用具有天然木糖代谢能力的树干毕赤酵母作为宿主，敲除树干毕赤酵母三羧酸循环中的编码富马酸酶的基因PSfum1和PSfum2，获得了富马酸酶缺失菌株；在所获得的菌株的基础上异源表达优化的富马酸还原合成模块，利用木糖发酵富马酸的酵母合成菌株；在酵母合成菌株的基础上，表达经密码子优化的来自栗酒裂殖酵母的转运蛋白YMAE，获得了发酵木糖生产富马酸的树干毕赤酵母合成菌株；将获得的菌株在完全合成的发酵培养基中高效发酵木糖生产富马酸，发酵培养3～4天，温度30℃，150～200rpm，富马酸含量大于4g/L。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 树干 酵母 合成 菌株 发酵 生产 富马酸 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种基于树干毕赤酵母合成菌株发酵木糖生产富马酸的构建方法，其特征是步骤如下：(1)采用具有天然木糖代谢能力的树干毕赤酵母作为宿主，敲除树干毕赤酵母三羧酸循环中的编码富马酸酶的基因PSfum1和PSfum2，获得了富马酸酶缺失菌株；(2)在所获得的富马酸酶缺失菌株的基础上异源表达优化的富马酸还原合成模块，获得了利用木糖发酵富马酸的酵母合成菌株；(3)在所获得的酵母合成菌株的基础上，表达经密码子优化的来自栗酒裂殖酵母的转运蛋白YMAE，其序列为SEQ ID NO：5，获得了发酵木糖生产富马酸的树干毕赤酵母合成菌株；(4)将获得的树干毕赤酵母合成菌株在发酵培养基中发酵木糖生产富马酸，发酵培养3～4天，发酵条件为30℃，150～200rpm。
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