[发明专利]一种粮食样品中硒形态的测定方法

摘要

本发明涉及一种粮食样品中硒形态的测定方法，包括如下步骤：1）检测的前期准备；2）粮食样品硒形态的提取；3）建立HPLC-HGAFS联用技术；4）上机测试与结果计算。该方法成本低，操作简便，提取效率高，可同时准确测定硒代胱氨酸（SeCys₂）、甲基硒代半胱氨酸（MeSeCys）、亚硒酸钠（Na₂SeO₄）、硒代蛋氨酸（SeMet）和硒酸钠（Na₂SeO₄）五种硒形态和含量。

主权项

一种粮食样品中硒形态的测定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1）粮食样品硒形态的提取：i）称取烘干、粉碎、过筛后的粮食样品，加入100 mmol/L Tris‑HCl进行超声提取；ii）提取后，加入纤维素酶对粮食样品进行破壁处理，恒温振荡；iii）依次加入蛋白酶K、蛋白酶XIV进行水解提取，恒温振荡，在4℃下，10000转/分，离心30 min，上清液过0.22 μm滤膜，得到待测溶液； 2）建立HPLC‑HGAFS联用技术：i）仪器条件：流动相：40 mmol/L(NH₄)₂HPO₄，pH 6.0；流速1 mL/min；进样体积100 μL；蠕动泵转速65 rpm；灯电流/辅阴极：100mA，45mA；光电倍增管负高压：300V；载气流速：300mL/min；屏蔽气流速：700mL/min；ii）氢化物发生条件：还原剂成分：0.35wt%NaOH+1.2wt%NaBH₄，流速：6 mL/min；氧化剂成分：0.5wt% NaOH+1wt% KI，流速：6 mL/min；载流：10wt% HCl，流速：6 mL/min；iii）配制硒代胱氨酸SeCys₂、甲基硒代半胱氨酸MeSeCys、亚硒酸钠Na₂SeO₄、硒代蛋氨酸SeMet和硒酸钠Na₂SeO₄混标，建立五种硒形态标准溶液的色谱图；3）上机测试与结果计算：样品中待测物硒代胱氨酸SeCys₂、甲基硒代半胱氨酸MeSeCys、亚硒酸钠Na₂SeO₄、硒代蛋氨酸SeMet和硒酸钠Na₂SeO₄的含量由下式计算得：X=C×V×F/m式中：X—样品中待测物质的含量，μg/kg；C—待测液中该物质的浓度，μg/L；V—测定液体总体积，mL；F—稀释倍数；m—称样质量，g。