[发明专利]一种无损伤冷抽提小型昆虫基因组DNA的方法在审
| 申请号： | 201510114907.5 | 申请日： | 2015-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN104630209A | 公开（公告）日： | 2015-05-20 |
| 发明（设计）人： | 魏攀;李锋;罗朝鹏;王燃;魏春阳;王中;武明珠;张剑锋;金立锋;杨军 | 申请（专利权）人： | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 郑州中民专利代理有限公司 41110 | 代理人： | 姜振东 |
| 地址： | 450001 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 一种无损伤冷抽提小型昆虫基因组DNA的方法，包括以下几个步骤：1）配制基因组DNA提取缓冲液；2）用95%酒精小心清洗昆虫体表的杂质，再用蒸馏水清洗；3）将昆虫放入离心管内，加入3～6倍虫体体积的提取缓冲液，50±5℃水浴； 4）-20℃放置14～17 h，冷抽提基因组DNA；5）加入蛋白酶K，使其终浓度为0.6 mg/mL，50±5℃水浴；6）95℃水浴灭活蛋白酶K；7）将昆虫从离心管中取出，管内溶液即含有该昆虫的基因组DNA。该提取方法不仅能够保持虫体的完整性，而且经过-20℃冷抽提，使昆虫的基因组DNA在低温条件下从虫体内充分释放，避免了基因组DNA的降解，提高了基因组DNA的质量。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 损伤 冷抽提 小型 昆虫 基因组 dna 方法 | ||
【主权项】：
一种无损伤冷抽提小型昆虫基因组DNA的方法，其特征在于：包括以下具体步骤：（1）配制基因组DNA提取缓冲液；（2）用95%酒精小心清洗昆虫体表的杂质，再用蒸馏水清洗2～4遍，吸水纸吸干虫体表面水分；（3）将昆虫放入离心管内，加入3～6倍虫体体积的提取缓冲液，50±5℃水浴1～2 h，每隔10～20 min轻柔颠倒混匀一次；（4）‑20℃放置14～17 h，冷抽提基因组DNA；（5）加入蛋白酶K，使其终浓度为0.6 mg/mL，50±5℃水浴1～2 h，每隔10～20 min轻柔颠倒混匀一次；（6）95℃水浴10～15 min，灭活蛋白酶K；（7）用无菌镊子将昆虫从离心管中取出，放入95%酒精中存留，离心管内的溶液即含有该昆虫的基因组DNA，‑20℃保存备用。
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